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国内:动物干扰素的研究进展



  在鸡干扰素的研究方面,近年来,夏春、程坚、刘胜旺、吕英姿等人采用PCR技术先后成功报道了丝羽乌骨鸡IFN、惠阳胡须鸡IFN—α、鸡γ—干扰素、石岐杂鸡α、γ—干扰素,鸭Ⅰ、Ⅱ干扰素等基因的克隆和序列分析,克隆得到的鸡IFN—α、γ基因的开放阅读框架?ORF?分别由约579和492个核苷酸组成;同时对禽类IFN基因的同源性进行了分析,确定了一些新的亚型;序列比对发现,不同品种鸡的同类IFN核苷酸同源性在90%以上,与相应的鸭IFN同源性在70%左右,提示同种不同品系禽类之间 IFN基因序列变异不大。yzyz
  吴志光等还对鸡α、γ—干扰素基因成功地进行了体外重组表达、纯化和活性测定,这些研究为我国禽类的基因文库构建和品种进化分析,以及基因工程干扰素的批量生产奠定了基础。yzyz
  张桂红等利用鸡白细胞、脾细胞、鸡胚成纤维细胞以有机锗?Ce—132?、新城疫弱毒株?NDV—F?、植物血凝素?PHA?、聚肌胞?PolyI:C?为诱生剂,对外源性IFN诱生条件如诱生剂量、诱生时间及培养条件进行了比较分析和探讨,结果发现诱生能力差异极显著?P<0.01?,且以Ce—132诱生IFN的能力为最强,其他依次为 NDV—F、PolyI:C、PHA;且鸡脾细胞和鸡白细胞产生的IFN效价高于鸡胚成纤维细胞;并且最佳诱生剂量依次为:Ce—132为70微克/毫升;鸡HDV—F为128HAU/毫升;PolyI:C为 50微克/毫升;PHA为40微克/毫升,这为干扰素的生产提供了参考资料。yzyz
时秀梅等用兽用干扰素诱生剂?由黄芪、党参、灵芝等中药精制而成?进行了抗病毒效果的试验研究,结果表明对传染性喉气管炎病毒?ILTV?、传染性法氏囊病毒?1BDV?等的临床防治效果显著。yzyz
  江国托等对目前市场上的鸡基因工程干扰素的临床应用情况进行了调查和研究,表明鸡干扰素在治疗ND、AE、ILT、IBD等疾病时疗效显著,并可广泛应用于其他病毒性和肿瘤性疾病,应用前景良好。他同时指出,科学的生产和应用有待深入研究。yzyz
在国外, Schltz等曾使用鸭重组Ⅰ型干扰素抗新城疫、禽流感和水泡性口炎病毒,取得了良好效果;尤其IFN对鸭乙型肝炎病毒感染有十分显著的治疗效果,15天内IFN可抑制鸭乙型肝炎病毒在肝细胞中繁殖。yzyz
  四、猪干扰素的研究进展yzyz
  猪干扰素是研究最早的动物干扰素之一,20世纪80年代就有猪干扰素的相关报道。近年来,对猪干扰素的诱导条件和理化活性有了进一步的研究,同时对猪白细胞干扰素进行了大量的临床试验。研究表明,它对猪的许多病毒性传染病如流行性腹泻、猪瘟、传染性胃肠炎等,以及对牛病毒性腹泻、小鹅瘟,羔羊腹泻等都具有不错的疗效,试验证实猪干扰素与牛羊等动物之间存在交叉活性。最近几年,猪干扰素α、β、γ基因的分子克隆与序列分析获得成功,谢海燕等采用PCR技术克隆得到的IFN—α基因由501个核苷酸组成,共编码166个氨基酸;夏春等克隆得到的猪β干扰素?IFN—β?基因片段长668个核苷酸,编码186个氨基酸。曹瑞兵等从经ConA诱导培养的猪外周血白细胞中扩增出猪IFN—γ基因,经改造后插入原核表达载体pRLG,并实现了在大肠杆菌中的高效表达,表达产物以包涵体形式存在,经变性、复性、脱盐、凝胶层析纯化处理,重组猪IFN—γ具有较高的干扰素活性。同时,万建青、陈涛等分别成功地在毕赤酵母表达系和大肠杆菌表达系统中表达出重组干扰素基因,表达产物占菌体总蛋白的比率在20%~35%之间,表达产物的具有抗病毒活性,为基因工程干扰素的规模化生产和应用提供了可能。yzyz
  五、鱼类干扰素的研究进展yzyz
  鱼类也是干扰素研究较早的动物之一。邵健忠等关于草鱼干扰素诱生条件的研究表明,草鱼IFN的合成受温度、病毒种类、病毒剂量、鱼体营养状况等因素的影响,25℃水温下诱生的IFN活性明显高于15℃和8℃。另外,采用细胞病变抑制法测定病毒诱导前后草鱼外周血中干扰素的活性变化的研究结果表明,经病毒诱导的草鱼血清中出现明显的干扰素抗病毒活性。草鱼组织干扰素体外诱生试验结果表明,从脾脏、外周血和胸腺组织中均能诱生出IFN,并且体外诱生的白细胞IFN与体内诱生的血清IFN是同一种物质,同时初步证实了T淋巴细胞是草鱼产生IFN的主要白细胞。采用半数细胞病变抑制等方法,成功用植物凝集素?Phytoagglutinin,PHA?在体内外诱导出草鱼γ—干扰素,并且发现佛波酯?PMA?和白细胞介素2?IL2?能显著地促进其诱生。对草鱼干扰素的免疫调节功能研究表明,其对草鱼巨噬细胞具有显著的激活作用,不同浓度干扰素对淋巴细胞的调节作用具有正负两方面的效应。张学文等通过分子重组,将人α—干扰素?hu—IFN—α?基因编码序列克隆到鲤鱼β—肌动蛋白基因启动子下游,构成能在鱼体内组成型表达hu—IFN—α的基因重组分子,获得了表达人α—干扰素的转基因草鱼,并检测到了转基因草鱼中人α—干扰素基因的表达;用转人—α干扰素基因草鱼肉糜饲喂大鼠进行食用安全研究,饲喂鼠临床表现正常,血液学指标、解剖学形态和重要器官功能组织学图像与对照组动物没有显著差别,推测可以安全食用。


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