摘 要： 用分离的鸡大肠杆菌地方致病菌株与大肠杆菌标准菌株制备细菌悬液，细菌含量大于1.8×1010个/mL，用4 mL/L浓度的甲醛溶液作用12 h，灭活后加入佐剂，制备鸡大肠杆菌多价灭活苗，免疫接种10日龄健康雏鸡，15 d后进行攻毒试验。结果表明，鸡大肠杆菌多价灭活苗的保护率可达98%。田间应用，鸡群产蛋期月死淘率由1.5%~3%下降到0.5%~0.8%。?
　　
　　关键词： 鸡大肠杆菌；多价灭活苗；免疫保护?
　　
　　鸡大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌（Escherichia coli）所引起的一种鸡的传染病。主要表现为败血症、心包炎、肝周炎、气囊炎、输卵管炎、腹膜炎、大肠杆菌肉芽肿和全眼球炎等。目前对本病的防治，一方面采用化学药物控制，另一方面采用疫苗接种的方法。由于化学药物的长期使用，产生了许多耐药性菌株，对动物和人类的健康都造成了严重的危害。因此，疫苗在本病防治中的作用显得尤为重要。为了防止本病的发生，笔者从当地不同鸡群中分离筛选出3株强致病菌株，与标准菌株一起研制出鸡大肠杆菌多价油乳剂灭活苗，用于鸡群的预防，收到满意的效果，现介绍如下。?
　　
　　1 材料与方法?
　　
　　1.1 材料?
　　
　　鸡大肠杆菌标准菌株，O1、O2、O35、O78和抗“O”血清，由中国兽药监察所提供。试验鸡，不同日龄健康鸡，由铜川某鸡场提供。试剂，司班-80、吐温-80，西安化学试剂厂；硬脂酸铝，上海中国远航化工厂；甲醛，分析纯，西安化学试剂厂；10号白油，杭州炼油厂。?
　　
　　1.2 方法?
　　
　　1.2.1 鸡致病性大肠杆菌的分离鉴定 无菌操作采集病料，接种于营养肉汤，经37 ℃ 24 h培养，将肉汤培养物转接到麦康凯琼脂平板划线培养，37 ℃ 24 h后挑取典型菌落接种三糖铁培养基及其它生化反应培养基。并对分离的3株菌用大肠杆菌抗“O”标准血清进行分型鉴定。?
　　
　　1.2.2 致病力试验 用分离菌的24 h肉汤培养物0.1 mL（含菌量约1.8×108 cfu）皮下接种30日龄健康小鸡4只，正常饲喂，观察发病及死亡情况。?
　　
　　1.2.3 菌苗制备 分别将地方分离株与标准菌株接种于营养肉汤，置37 ℃温箱24 h进行种子培养，观察有无杂菌污染，然后接种于营养琼脂平板进行大量培养，用生理盐水洗下菌苔按一定比例混合，制备1.8×1010cfu／mL浓度的细菌悬液，再经反复冻融震荡，使菌体菌毛脱落，并使部分菌体裂解，充分暴露其抗原成分。最后向菌液加入终浓度为0.4 mL/L的甲醛，无菌检验后参照“兽医生物药品制造规程”制成油佐剂灭活苗。?
　　
　　1.2.4 菌苗的检验?
　　
　　（1）物理性状。菌苗的物理性状为乳白色、均匀一致，将其滴于冷水中，漂浮于水面，有向外扩散的趋势，久置不分离。?
　　
　　（2）安全试验。取23日龄和18周龄健康鸡各10只，每只皮下注射菌苗2.5 mL（5倍免疫剂量）观察10 d。?
　　
　　（3）免疫保护试验。按照菌苗中所含血清型种类，取10日龄健康雏鸡50只，分5组，每种血清型10只，分别每只鸡皮下注射菌苗0.5 mL，免疫接种后21 d，分别以相应的血清型大肠杆菌肉汤培养物攻毒，每只注射菌液0.2 mL（含菌量约3.6×108 cfu）?
　　
　　2 结果?
　　
　　2.1 大肠杆菌的分离鉴定?
　　
　　分离菌接种麦康凯培养基37 ℃ 24 h后，呈现边缘整齐或波状、稍突起，表面光滑湿润，直径1 mm~2 mm、粉红色或深红色的圆形菌落，在伊红美蓝琼脂上呈紫黑色带金属光泽的圆形菌落，在普通琼脂平板上呈灰白色，直径1.5 mm~2 mm的圆形菌 FL) 落；细菌涂片染色检查为革兰氏阴性、大小一致的杆菌。?
　　
　　3株地方分离株分别接种到三糖铁培养基上，经37 ℃ 72 h培养，产酸、产气，不产生硫化氢。生化特征为：分解葡萄糖、乳糖、甘露醇，产酸产气；分解阿拉伯糖；吲哚试验、甲基红试验呈阳性反应；尿素酶、明胶液化、柠檬酸盐利用试验，VP试验等呈阴性反应。?
　　
　　对分离的3株地方菌株分别用中国兽药监察所提供的大肠杆菌“O”抗原定型血清进行分型。其中2株血清型分别是O2、O35，另1株未能分型。?
　　
　　2.2 菌株的致病力试验?
　　
　　分离菌株的24 h肉汤培养物攻毒后24 h～48 h，接种鸡发病并死亡，死亡率为100%。
　　
　　2.3 疫苗的安全性试验?　
　　
　　用自制灭活苗分别免疫24日龄和18周龄鸡各10只，每只鸡皮下注射2.5 mL，除有一过性精神沉郁外，没有发病和死亡。?