分离培养:用不同的培养基如绵羊鲜血琼脂、血清琼脂等培养基,于37℃温箱培养20-24小时,再取其典型菌落接种马丁肉汤培养基,培养20-24小时,再作涂片检查及测生化反应,动物接种和血清学检验等。
动物接种:可以取被子检兔的脏器磨细用灭菌生理盐水作1:5或1:10稀释,也可以用分离培养菌落接种的马丁肉汤作为接种材料。一般以皮下、肌肉、腹腔、静脉或滴鼻接种家兔或小白鼠,剂量:兔0.5毫升为宜,小白鼠0.2毫升即可。若接种后兔或小白鼠发病或死亡,有典型的病理变化即可确诊。
血清学检验:其目的在于应用血清学方法对兔群进行普查诊断。方法有试管法和玻片法。试管法:将待检血清作成不同稀释度,分别加入等量诊断抗原,摇匀后放置于37℃温箱或室温2-3小时观察,凝集价在1:40以上者为阳性反应。玻片法:取被硷血清0.1毫升加于玻片上,同时加入等量诊断抗原,于15-20℃下摇动玻片使抗原与被检血清均匀混合,1-3分钟内观察絮状物,液体透明者为阳性。
2·病毒性疾病 由于各种病毒在不同组织中含毒量不同,所以必须要采取含病毒量最多的组织,并要求新鲜,如兔病毒性出血症含毒量最多者是肝组织,水疱性口炎应采水疱液、水疱皮为被检材料。
病毒的分离培养:用被检材料接种于新鲜琼脂培养基或血清血红素培养基,结果均为阴性者则将被检材料磨细或将液体材料用无菌生理盐水(PH7.2左右)、磷酸盐缓冲液作1:10稀释用6号玻璃滤器过滤的滤液即可作为接种材料,同时在接种液中加入青、链霉素(每毫升1000单位)。
接种:根据接种材料可以分为下面三种方式:
鸡胚接种:取9-10日龄的鸡胚,每胚绒尿腔接种0.2毫升,一般在接种后48-72小时内死亡。
组织细胞接种:用各种动物组织的原代细胞或传代细胞接种,病毒能在细胞上繁殖,同时能使细胞产生病变。
动物接种:通常用小白鼠、豚鼠和家兔接种病料。有的接种家兔一般皮下、肌肉或腹腔注射0.5毫升,有的用豚鼠皮内接种,如水疱性口炎。
(3)病毒的鉴定:分离得到的病毒材料要以电子显微镜检查、血清学试验即可确认,进一步还需做理化和生物学特性鉴定。
(4)血清中和试验:在被检病料上清液中加入等量该病标准高免血清,混匀后于37℃温箱作用30分钟;对照组用生理盐水代替血清。两组材料分别接种易感动物,一般观察7天。如果血清组获保护,而对照组发病死亡即可确诊。
(5)兔疫学诊断:是一种重要的诊断技术,这些方法具有灵敏、快速、简易、准确的特点,用于传染病的诊断,大大地提高了诊断水平,至今应用已十分广泛。
在动物传染病的免疫学检验中,除凝集反应、沉淀反应、补体结合反应;中和反应等血清学检验方法外,先后又研究出兔疫扩散、变态反应、萤光抗体技术、酶标记技术、单克隆抗体技术等属于免疫学诊断的范畴。
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