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花卉种苗脱毒处理技术关键点



  热处理脱毒
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  选取生长健壮、外观无明显病虫害症状、品种特性比较典型的种苗,挖出根系,抖尽宿土,定植于装有灭菌基质的花盆内。植后浇足水,适当遮阴,确保成活。待脱毒种苗成活并长出新叶后,移入人工气候箱内,先将温度控制在28℃至30℃,3天至5天后将温度调至38℃±1℃,进行热处理并开始计时。热处理28天后,将种苗移至防虫温室内继续培养,采其新枝扦插或组织培养,育成正常种苗。
  把新育成的正常种苗分株系进行病毒检测,淘汰带毒苗。未检测出病毒的其余种苗,一个月后再检测一次,确认无病毒可直接作为原种苗保存和繁殖。
  茎尖培养脱毒
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  对植株进行摘心,促进分枝生长。待分枝长至三四对叶时,采摘下最靠近根基部的分枝。冲洗后,剥去茎干上的叶片,切取一两厘米长的嫩梢。将整理好的脱毒材料用肥皂粉溶液浸泡15分钟后,用自来水流水冲洗一小时,然后转到无菌室内进一步处理。在超净工作台中将冲洗干净的嫩梢用75%的酒精浸渍0.5分钟,然后用5%浓度的次氯酸钠溶液灭菌10分钟,无菌水冲洗3至5遍后备用。
  在解剖镜下将材料置于消毒的滤纸片上,用经消毒的手术刀和镊子剥离外层幼叶,切取0.3毫米至0.5毫米直径大小、带一两个叶原基的茎尖组织,接种于经过高温消毒的分化培养基上。需要注意的是,茎尖的上下面不能颠倒。接种好的茎尖应分别编号,置于25℃±2℃、光照强度1500勒克斯至3000勒克斯、每天光照10小时至12小时的条件下培养,两三个月后可分化出新芽。
  采用增殖培养基,将分化长出的丛生苗切割成单株转接至培养基上,培养条件与分化培养相同。待单株苗又生丛生苗时,可取样进行病毒检测。带毒无性系整瓶淘汰,无病毒无性系可继续转接增殖。20天至30天转接一次,2至3代后再测一次病毒,确认不带病毒后继续增殖,否则仍需淘汰。
  不带毒样品上切取1.5厘米至2厘米的嫩梢接人适宜的生根培养基中。在25℃±2℃和光照1500勒克斯至3000勒克斯条件下,培养15天至20天即可长出新根。将生好根的瓶苗置于强光下,开瓶锻炼两三天。洗净根部黏附的培养基后,栽入泥炭和珍珠岩以1?1比例混合的培养基质中,浇透水,盖上塑料薄膜保湿并遮阴。10天后逐渐通风透光,每周浇一次1/4至1/8MS溶液促进生长。两三个月后可以进行品种特性测试栽培,如无变异可作为原种繁殖和保存。
  热处理结合茎尖培养脱毒
  先将选取的植物材料进行热处理,剥取热处理过程中长出的新梢顶端0.3毫米至0.5毫米的茎尖进行组织培养,然后分化成丛生苗,经切割转接,于25℃±2℃培养室扩繁培养。对每个芽扩繁而成的组培苗统一编一个号,每个编号经培养成苗后都应取样进行病毒检测,确认不带病毒后方可进一步扩繁,带病毒者则整个编号的苗予以淘汰。
  (作者系南京农业大学园艺学院副院长兼花卉所所长)


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