养禽生产中，由于鸡新城疫常发不断、加之H9亚型禽流感也频频在养鸡场发病，给养禽生产带来了不小的困扰。特别是禽流感H9亚型经历了1998～1999年、2001～2002年两次大的流行后，病毒对鸡只（不论是蛋鸡还是肉鸡）的危害越来越严重。在2002年初，由于禽流感H9亚型引起大量蛋鸡产蛋急剧下降。为了更好地认清该病的发病特点并避免其产生的危害，洛阳普莱柯生物技术有限公司对大量的临床病例进行了诊断和病毒的分离、纯化和鉴定研究，最终开发研制出了高效、优质的鸡新城疫、禽流感（H9）二联油乳剂灭活疫苗（以下简称“新流二联灭活苗”），并荣获国家三类新兽药证书<新兽药证书号：（2007）新兽药证字18号>。

一、研发背景及交叉免疫保护实验研究

近年来，H9亚型禽流感因鸡感染症状轻微（死亡率<30%），只是引起减蛋和经济损失，并未引起人们的高度重视！自2001年底至2002年春，国内部分省市发生一种以种鸡严重减蛋、发病率高死亡率低为特征的不明原因的禽病，给蛋鸡场和种鸡场造成严重的经济损失。为此，洛阳普莱柯公司研发部从2002年初开始进行病毒分离工作；后经河南省畜牧局、中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家禽流感参考实验室鉴定确认为H9N2亚型病毒，中国兽药监察所复核证实，斯帕法斯试验室确定外源性病毒，证实分离到的病毒为纯净、单一的禽流感H9N2亚型病毒，可作为疫苗种子毒。

公司对2001～2002年从流行病例分离出的疫苗种子批HL株与2005年从GD、JS、SX和2006年从SD、JL、HN等地流行病例分离到的毒株作了交叉免疫保护试验，结果发现用疫苗种子批HL株免疫的鸡可保护GD、JS、SX、SD、JL和HN等地的流行毒株的攻击；但用GD、JS、SX、SD、JL和HN等流行毒株免疫鸡对HL株的攻毒保护只有90%的保护率。

2003年，研究开展毒种抗原性研究、种子批建立、抗原复配、抗原浓缩等工艺研究；此外，效力检验、安全性研究、稳定性研究、对比试验、攻毒保护试验等一系列研究进展顺利，在实验室成功研制出鸡新城疫、禽流感（H9亚型，HL株）二联灭活疫苗，经过严格的中间试制，完全符合疫苗质量标准。随即申报河南省畜牧局批准，并进行了3万多只鸡的临床试验研究，证实疫苗安全有效。

2006年，新流（H9亚型禽流感）二联灭活疫苗通过中国兽药监察所的复核试验，并通过农业部审评中心专家组复审，2007年6月终于获准上市。

二、新流二联灭活苗的创新点

新流（H9亚型，HL株）二联灭活苗有如下九个方面创新点：

1.禽流感H9亚型、HL株是普莱柯公司申请批准的专利毒株。该毒株是国内第一个从临床病例中分离出来的流行性禽流感病毒株；

2.新流（H9亚型，HL株）二联灭活苗是独立自主研发的、完全拥有独立知识产权并获国家发明专利，解决了疫苗研究领域的重大技术难题之一，推动了行业进步；

3.与其它厂家在1990's分离到的H9亚型禽流感毒株比较，普莱柯公司的专利毒株抗原性更接近临床发病毒株，具有较高的免疫原性，免疫保护力强，产生的抗体高；

4.新流（H9亚型，HL株）二联灭活苗是分别接种不同鸡胚收毒，并经美国Millipore膜浓缩设备超滤浓缩而成，两种抗原组分均含有相同的效价；

5.攻克了联苗生产工艺中抗原浓缩、多组分抗原复配、抗原纯化、效价测定等关键技术，实现了工艺创新，生产工艺达国际一流水平，标志着我国禽用多联灭活疫苗自主研发和创新能力上了一个新台阶，达到了国际先进水平；

6.疫苗可使用进口佐剂，免疫原性强，刺激机体产生抗体水平高；

7.抗原超强浓缩，含量高，抗体产生快，效价高，保护期长；

8.抗原经过纯化处理后，疫苗应激小、残留少、粘度低、好抽易打、注射方便；

9.一针防两病，省力省钱。禽流感（H9）二联灭活疫苗是目前预防H9亚型禽流感、新城疫等家禽重大疫病最经济高效的疫苗，大大降低免疫注射劳动强度及应激反应，使用成本下降50%，解决了生产之急需。

三、生产工艺上的创新点

1.灭活疫苗中主要成分是抗原和佐剂，普莱柯公司为确保产品质量达到国际标准（欧洲Ⅲ号标准），全部使用近口免疫佐剂，确保其免疫原性好；

2．抗原处理首先采用高速离心去除颗粒及杂蛋白，其次使用全套引进的美国MILLIPORE膜浓缩设备超滤浓缩抗原，有效去除尿酸盐等产生毒副作用成分，确保抗体含量的均一，最后采用低温乳化技术，全过程保证抗原效价稳定；