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　　2．3 阻断性试验结果 以1 000、2 000 EID50?/ml的病毒量不能阻断染色反应，但染色强度减弱，而4 000、8 000 EID50?/ml的病毒量完全阻断了染色反应，正常鸡胚尿囊液则呈现强阳性。?yzyz
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　　2．4 试验感染雏鸭组织器官中DHV检测结果 对不同感染时间雏鸭器官组织切片酶染观察发现，感染后6h在肝细胞的胞浆内出现了棕黄色反应物，部分肾脏、小肠和脾脏切片的细胞浆开始检测到棕黄色反应物。12～16 h，肝脏、肾脏、肺脏、脾脏、小肠切片均能检测到棕黄色反应物。至24 h，心肌和脑组织细胞均能检测到棕黄色反应物。随着时间的延长，所有组织阳性细胞数量逐渐增多，胞浆内反应物加深呈棕色。检测结果见表2。 yzyz
　　表2 试验感染雏鸭各组织器官中DHV抗原动态检测结果(略) yzyz
　　3 讨论 ? yzyz
　　3.1 在组织抗原定位的检测中，一般多应用免疫荧光抗体技术和免疫酶组化技术，但由于免疫酶组化技术的敏感性和特异性不仅可与荧光技术相媲美，而且所获的结果可以长久保存，在普通光学显微镜下即可观察，应用范围更广。所以本研究以鼠源抗DHV高免血清为一抗，HRP标记的羊抗鼠IgG为二抗，建立了间接过氧化物酶组化法检测石蜡切片中DHV的技术，经过特异性试验和阻断性试验表明该方法具有良好的特异性，特别是通过Harris苏木素衬染组织后，不仅对DHV在组织中可以精确定位，而且可以同时观察组织病理学变化，因此，本研究建立的免疫酶组化技术尤其适合鸭病毒性肝炎的病毒抗原定位和动态分布以及发病机理的研究。? yzyz
　　3.2 从试验感染雏鸭各组织器官中DHV抗原动态检测结果可以看出，DHV侵入雏鸭机体后最先在肝细胞检测到，其后是从肾脏、肺脏、脾脏、小肠、胰脏等组织细胞中检测出，最后是从心肌和脑组织细胞中检测到DHV，这一结果与所报道的免疫荧光测定、运用组织匀浆结合病毒滴度测定及应用单克隆抗体PAP法测定结果一致而与汪铭书等所报告的DHV强毒在雏鸭体内Dot-ELISA检测到的顺序不完全一致。试验结果表明，DHV定位的首选靶器官应当是肝脏，其次是脾脏、肾脏、肺脏和肠，所以DHV主要是通过粪便排泄到体外，而且感染途径可能主要是经口感染。至于DHV在脑组织中较晚检测到可能是由于受到血脑屏障的作用，一旦病毒突破了血脑屏障到达脑组织后引起脑细胞病变，但雏鸭出现以角弓反张为主的神经症状后不久死亡，是否有理由认为DHV强毒对雏鸭有致病能力是因为病毒能进入雏鸭脑组织，有待进一步研究证实。另一方面我们认为DHV引起雏鸭急性肝炎导致肝功能衰竭（肝昏迷），是引起感染雏鸭发病和死亡的一个重要原因。