（一）病毒分离与初步鉴定 可采集病、死鸡的气管、支气管、肺、肝、脾、粪便、肠内容物或泄殖腔和喉气管拭子作为分离病毒的样品，对于慢性和非典型病例，可采集脑组织。将病料研磨成乳剂，按1∶5加入生理盐水稀释成悬液，离心后用过滤器除菌或加庆大霉素等抗生素除菌。首次分离病毒最好经尿囊腔途径接种9～10日龄鸡胚，最好是SPF鸡胚或非免疫鸡胚，接种后置37℃恒温箱中培养。鸡胚接种后有以下几种情况：如鸡胚在接种后72h内死亡，胚体全身出血，尿囊液HA呈阳性，有可能为强毒；鸡胚可能不死亡或第5d～6d才死亡，胚体轻度出血或无出血，HA呈阳性，这种情况有可能是弱毒；鸡胚不死亡，HA呈阴性，病料中可能无病毒或病毒的含量很低，此时可将鸡胚尿液再盲传1代。
　　（二）病毒的进一步鉴定 因禽流感病毒、减蛋综合征等其它一些病毒也具有凝集鸡红细胞的活性，所以在HA呈阳性后，还必须用新城疫抗血清对分离的病毒进行红细胞凝集抑制试验（HI试验），最好同时分别用新城疫、禽流感和减蛋综合征的抗血清与分离物做HI试验。如果新城疫抗血清能抑制被分离物的HA活性，而其它血清不能将其抑制，则被分离的病毒为新城疫病毒；如病毒的HA活性分别能被新城疫及禽流感的抗血清所抑制，则提示分离物中在感染了新城疫的同时还合并感染了禽流感。
　　在确定为新城疫病毒后，还必须进行病毒的毒力测定，以确定被分离的病毒是野外强毒还是疫苗株病毒。作为一般生产性诊断，可将分离的病毒接种非免疫鸡或SPF鸡，如果病毒能致死敏感鸡，则可确诊。
　　必要时也可进一步作致病指数的测定，包括鸡胚平均死亡时间（MDT）、脑内接种指数（ICPI）、静脉接种指数（IVPI）、已凝集的红细胞洗脱速度、蚀斑形成特点、病毒基因序列分析等。
　　（三）其他诊断方法 其他诊断方法包括红细胞凝集抑制试验（HI）、血清中和试验、免疫荧光抗体、酶联免疫吸附试验（ELISA）、单克隆抗体技术、核酸探针等分子生物学技术等。由于目前鸡群已普遍接种新城疫的疫苗，血清学方法如未能区分抗体来自疫苗还是野外病毒之前，必须比较感染前后的抗体滴度是否有明显上升，才具有诊断意义。
新城疫是危害严重的禽病，必须严格按国家有关法令和规定，对疫情进行严格处理，必须认真地执行预防传染病的总体卫生防疫措施，以便减少暴发的危险，尤其是在每年的冬季，养鸡场均应采取严格的防范措施。
　　按规定，怀疑为新城疫时，应及时报告当地兽医部门，确诊后立即由当地政府部门划定疫区，进行扑杀、封锁、隔离和消毒等严格的防疫措施。
　　对假定健康的鸡群及受威胁的鸡群应立即进行紧急预防接种，一般可用5～10倍IV系疫苗作肌肉注射接种。紧急接种后几天，鸡群发病数或死亡数可能会有3d～7d的上升，然后会逐渐下降及至正常。对这样的鸡群，适当使用抗菌药物以减少大肠杆菌的感染，可减少死亡损失。
　　免疫接种是预防新城疫的有效手段，目前，国家许可使用的疫苗包括弱毒疫苗和油佐剂灭活疫苗，基因工程疫苗目前尚未进入大生产的实际应用。弱毒疫苗中，又有毒力比较低的缓发型疫苗株，例如F株、LaSota株、（国内称为Ⅳ系）、HitchnerB1株（国内称为Ⅱ系）、Clone30（克隆30）株、V4株等；也有毒力较强的中发型毒株如Mukteswar株（国内称为Ⅰ系）、H株、Komarov株及Roakin等。虽然上述缓发型毒株毒力较低，可用于未经过免疫的鸡群做首次基础免疫，但有时接种疫苗后几天内也可能有轻度的呼吸道应激，如呼吸道啰音、咳嗽等。至于中发型疫苗，由于毒力较强，只能用于经过基础免疫的鸡群作加强免疫用，如将此类疫苗用于无抗体的鸡群或日龄较小的鸡群，则往往会引起严重的反应和不同程度的死亡损失。
　　缓发型疫苗，可经点眼、滴鼻、饮水、气雾或肌肉注射等途径接种，其中以滴眼、滴鼻和气雾途径的效果较佳；中发型疫苗，则常常采用肌肉注射途径接种。
　　免疫程序应根据鸡群的实际情况来确定，但要特别注意加强鸡群的局部免疫力，以下介绍的是一个在环境比较复杂和受新城疫威胁较严重的地区的免疫程序，仅供参考，在环境较干净的地区，接种次数可适当减少。
　　1日龄，用克隆30、Ⅱ系或Ⅳ系滴眼、滴鼻免疫。
　　10～15日龄，肌肉或皮下注射灭活油乳剂疫苗（0.3ml～0.5ml/只），同时用克隆30、　　II系或IV系疫苗滴眼、滴鼻免疫一次。