摘要：

将六味治疗腹泻的常用中药黄连、黄柏、秦皮、白头翁、地锦草、马齿苋煎汁后，各按5%用量加入营养肉汤和20% PTYG液体培养基中，再分别接种双歧杆菌和大肠杆菌，于适宜的条件培养后，进行菌落计数。结果发现：黄连对双歧杆菌的生长略有抑制，但幅度较小；其余各药对双歧杆菌均无明显的抑制作用；而六味中药对大肠杆菌的生长均有明显的抑制作用。?

关键词: 中药；大肠杆菌；双歧杆菌；生长?

一般认为，当有害菌在肠道内大量增殖占绝对优势时，会使益生菌的生长受抑制，结果造成肠道菌群异常而引起腹泻。人们已根据黄连、黄柏、秦皮、白头翁、地锦草、马齿苋等六味中药对肠道致病菌有良好的抑制作用，研制出各种制剂治疗肠道疾病。但这六味中药是否会对双歧杆菌等肠道益生菌产生影响，目前的研究报道还较少。并且，过去对病原菌的抑菌试验多采用平皿法，而少见试管法。为此，笔者采用试管法，观察了上述六味中药对大肠杆菌和双歧杆菌在体外生长的影响，以期更加全面地对中药治疗腹泻的机理进行进一步地探索。

1 材料与方法?

1.1 材料?

1.1.1 中药 黄连( Coptis Chinensis anch)、黄柏(〖WTBX〗Phellodendron Chinense Schneid)、秦皮(Cortex Fraxini Caulis)、白头翁(amenone)、地锦草(Herba Euphorbiae Hunifusae)、马齿苋(Portulaca Oleracea L.)，由本院中药实验室提供。?

1.1.2 菌种 大肠杆菌(E. Coli〖WTBZ〗)、短双歧杆菌(B.Breve )、青春双歧杆菌(B. adolescentis)为本实验室保存菌种，均经中国科学院微生物研究所鉴定。1.1.3 培养基 PTYG培养基、营养肉汤，按有关文献配制。20%PTYG培养基，是将PTYG培养基组分按20%量配制。?

1.1.4仪器 超净工作台、高压蒸汽灭菌锅(上海核子实验仪器厂)；恒温培养箱、SYQ型厌氧培养箱(上海跃进实验器械厂)。?

1.2 方法?

1.2.1 中药的制备 将黄连、黄柏、秦皮、地锦草、白头翁、马齿苋六味中药，用纱布分别包扎，分别加水煎汁浓缩至浓度为1 g/ml，放入4 ℃冰箱备用。另将秦皮、黄连、黄柏、白头翁按质量比(8∶3∶6∶8)配合成方，煎成白头翁汤(即经验配方)，浓缩至含药1 g/ml。?

1.2.2 对大肠杆菌生长影响试验 将六味药汁和白头翁汤按0.5 ml剂量分别加入装有9 ml营养肉汤培养基的试管各5支中，另取5支营养肉汤对照管，于115 ℃、30 min灭菌后，将大肠杆菌培养液0?5 ml接种于各试管，于37 ℃温箱中培养18～24 h。后利用营养琼脂培养基作大肠杆菌菌落计数。?

1.2.3 对双歧杆菌生长影响试验 先将双歧杆菌于PTYG培养基中增菌培养，活菌浓度控制在1×10?8/ml。将六味药汁和白头翁汤按0?5 ml剂量分别加入装有9 ml 20% PTYG液体培养基的试管中。另取20% PTYG液体培养基对照管，于115 ℃、30 min灭菌后，将短双歧杆菌、青春双歧杆菌增菌液0?5 ml分别接种于上述试管中，每种作5个平行管，于厌氧培养箱中37 ℃培养48 h后，以PTYG培养基作平板菌落计数。?

2 结果?

结果见表1。从表1中可知，六味中药对大肠杆菌的生长均有明显的抑制作用，其中以黄连的抑菌作用最为明显，黄柏次之，其余几味相差不大。另外，白头翁汤中各药均对大肠杆菌有明显抑制作用，但四药合方后对大肠杆菌的抑制作用并未有明显增强。黄连对双歧杆菌的生长略有抑制，但幅度较小；其它几味中药对双歧杆菌的生长没有明显的影响。

表1 中药对大肠杆菌和双歧杆菌生长的影响(CFu/ml)

菌株 对照 黄连 黄柏 秦皮 白头翁 马齿苋 地锦草 白头翁汤

大肠杆菌 1.6×109 1.1×106 9.8×106 1.7×107 2.5×107 2.2×107 2.3×107 1.2×107

短双歧杆菌2.4×107 1.2×107 1.8×107 1.8×107 2.0×107 2.1×107 2.2×1071.8×107

青春双歧杆菌4.3×107 1.7×107 3.5×107 3.7×107 4.0×107 4.0×107 4.5×107 3.5×107

3 讨论?

3.1 据报道，通过平皿试验得知，白头翁汤合剂中四药的抗菌作用以黄连、秦皮为强，黄柏次之，而白头翁最弱。但本试验所得结果为黄连最强，依次为黄柏、秦皮、白头翁。由于时间仓促，我们没有验证六味中药平皿抑菌试验的结果，因此，还有待于比较两方法的差异，查明两方法得出不同结果的原因。此外，由于条件所限，本实验仅采用5%的加药量，其它浓度加药量效果如何，仍有待于进一步研究。?

3.2 有研究报道，白头翁汤中各药无协同或拮抗作用，且白头翁汤中去掉黄连后仍有较好的抑菌作用。本次体外实验结果也显示：白头翁汤对大肠杆菌的抑制作用与单药相比未见有显著增强，而临床经验证明使用白头翁汤比仅使用其中一种药的疗效要好，原因可能是天然药物所含的多种成分与机体发生复杂的反应，结果造成临床效果与体外实验结果的差异。?