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摘要：抗体琼脂扩散试验是当前卵黄抗体效价测定的主要方法之一，该方法简洁、快速非常适合于临床中应用，但是该方法容易受到多种因素的影响而导致试验结果判断的不准确。本文就琼脂扩散试验中抗原抗体本身性质、反应特点、最适比例、可逆性、总量以及琼脂、水等所有能影响试验结果的因素进行了逐一分析。

关键词：卵黄抗体；琼脂扩散试验；影响因素

卵黄琼脂扩散试验是通过抗原、卵黄抗体在琼脂凝胶中由近及远不断自由扩散形成浓度梯度，在适当比例处相遇形成沉淀线，并由此来判断抗体的效价的一种技术。琼脂扩散试验主要是用于可溶性胶原性抗原及其所对应抗体水平的检测，兽医临床中主要用于法氏囊、新城疫等抗体效价的检测。由于卵黄内抗体效价与鸡体内的效价几乎相同，所以我们通过琼脂扩散试验测定卵黄抗体的效价，可以在不刺激鸡体的情况下就可知道产蛋鸡的抗体水平和免疫效果。卵黄琼脂扩散试验操作简单、所用的仪器少、结果易判断，因此被越来越多的养殖户、兽医工作者所采用，成为他们制定产蛋鸡免疫程序的主要依据。但是琼脂扩散试验的结果容易受到抗原抗体因素、琼脂、反应条件以及其它因素的影响而导致抗体效价测定不准确。为了能使临床中广大实验操作人员对琼脂扩散试验能有一个更深刻的认识，现将以上各种影响因素分析如下。

1抗原抗体因素

琼脂扩散试验受抗原抗体本身性质、抗原抗体反应特点及其它因素的直接影响。

1.1抗原抗体的性质

1.1.1抗体性质：抗体的特异性与亲和力是影响琼脂扩散试验的主要因素。抗体的特异性是由抗体可变区的原子空间排列以及它们的电子结构和极化特性决定的，亲和力是复杂抗原与相应抗体之间的总的结合能力。抗体的亲和力很低时不易用琼脂扩散试验测定。一般情况下，在免疫初期，卵黄抗体的特异性较高但亲和力不高，后期，卵黄抗体的亲和力高但相应的特异性变低。

1.1.2抗原性质：抗原的种类、抗原决定簇的数目和理化性质等因素都能影响琼脂扩散试验的结果。琼脂扩散试验是利用可溶性的抗原与抗体在琼脂凝胶网格中的水中自有扩散，相互结合形成的沉淀线来判断结果的。这样就要求抗原与抗体必须都是可溶性的，因为一些颗粒性的抗原如细菌、红细胞等是不溶的，这样的抗原相对应的卵黄抗体效价就不能用琼脂扩散试验来测定。在琼脂扩散试验中要求抗原是多价的（抗原决定簇≥2），单价抗原不能形成抗原抗体复合物，因此不能产生可见反应。抗原的分子量、PH值等理化因素也直接影响到实验的结果。

1.2抗原抗体的反应特征 抗原抗体反应特征影响琼脂扩散试验结果的因素有:抗原抗体最适比、抗原抗体反应的可逆性、抗原抗体的量。

1.2.1抗原抗体的最适比[3]：抗原抗体的反应虽决定于两者的化学构型的相应性，但不同于一般的化学反应，其结合比例不完全符合化学反应的质量作用定律，因为抗原抗体的结合是一种多价相互作用的结合。抗原根据分子大小的不同，结合位点变化很大，由10－50不等，有的甚至达到200个；卵黄中的抗体成份主要是IgG，有两个结合位点，卵黄抗体除了常见的鸡传染性法氏囊炎抗体外，还有鸭病毒性肝炎、猪瘟[4]等高免卵黄抗体，这些抗体的效价都可以用琼脂扩散试验来测定。当抗原抗体的浓度比例适宜时，抗原抗体结合后尚未达到饱和的位点可与其它游离的抗原抗体继续结合，逐渐形成越来越大的复合物。最后在抗原与抗体孔之间形成肉眼可见的沉淀线。此时反应最快、最明显。但当两者的量不适合时，少的一方在聚合初期就达到饱和，沉淀线变得不清晰甚至没有沉淀线，而且沉淀线偏移，向量少的一方移动。