SPA免疫检测技术是根据葡萄球菌A蛋白(SPA)能与多种动物lgG的Fc端结合的原理,用SPA标记物(酶、荧光、放射性等标记)显示抗原与抗体结合反应的各种免疫检测试验。最早于1982年建立了酶标SPA的ELISA试验。
(一)原理
SPA可从金黄色葡萄球菌细胞壁中提取,为395个氨基酸组成的多肽,有四个能与1gG的Fc结合的位点,即一个SPA分子可结合4个lgG分子。SPA可与人、猪、狗、小鼠、豚鼠、成年牛、绵羊等20多种动物lgG结合,而与兔lgG的结合力报道不一,鸡、马、山羊、犊牛lgG 不能与SPA结合。因此,制备SPA标记物后,可应用于多种动物,不受种属限制,可应用于同一种动物的各种免疫检测(如猪的各种传染病的酶标检测),有了SPA标记物,就不需标记各种抗体或抗原,即SPA标记物可作为一个通用试剂,它使免疫检测方法向更简便、更商品化进了一大步。
(二)应用
1.SPA放射免疫分析 在固相放射免疫分析中,可利用125I-SPA代替标记的抗抗体。先将抗原包被于固相载体,然后加入被检血清作用洗涤后,加入125I-SPA作用,洗去未结合的部分,计数测定管中的放射活性。此法灵敏度高,可测出ng/ml的抗体含量,需时短,重复性好。同样也可建立检测抗原的SPA放射免疫分析。
2.SPA酶标检测技术 用辣根过氧化物酶标记的SPA(HRP-SPA)可用于酶免疫组化法染色。由于HRP-SPA比HRP-IgG分子小,能更好地穿过细胞膜,使在免疫电镜亚细胞水平定位分析中,具有更好的辨析力。用HRP-SPA建立的ELISA则具更多的优越性,即它可作为多种动物,以及同一种动物多种抗原抗体检测的通用试剂,已经得到了广泛的应用。如国内已建立了检测猪瘟的SPA-ELISA试剂盒 。
3.SPA荧光抗体技术 荧光SPA主要用于淋巴细胞表面标志研究,亦可代替荧光抗体进行病毒抗原、肿瘤抗原等的检测。
4.SPA其他标记技术 如SPA胶体金、SPA-发光免疫技术等。
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来源:互联网
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