本课题组于2005年8月到2006年3月，在天津及华北地区进行了较大规模的白灵菇液体菌种生产与应用推广工作，推广面积达180栋棚室（560平方米/栋），平均生物学效率达45%，菇农与公司获得了双赢。现将该技术总结如下，以供大家参考。

    1 固体母种制作

    将冷藏的母种提前活化3～5d，制平板挑取优质菌丝尖端进行提纯复壮。取新鲜无霉变的稻草切成3cm段200g；另取200g削皮、去芽的马玲薯，切成棱形块，约金桔大小，放入冷水盆备用。用不锈钢锅，加2000mL自来水（pH7.0～7.5）与上述马玲薯及稻草同煮，煮沸计时30min，将其用多层医用纱布过滤，取过滤液近1000mL，加琼脂20g，完全溶化后，再加入葡萄糖20g，七水合硫酸镁1.5g，磷酸氢二钾3g，VB1，4mg完全溶解后，定溶1000ml，pH自然。大于45℃趁热分装18mm×180mm硬质试管110～125支，加棉塞，并用双层聚丙烯塑料薄膜包好，7支1捆灭菌备用。灭菌压力达0.12MPa记时，保持25min。冷却至45℃将培养基试管取出，轻轻转动试管，防止冷凝积水，立即摆斜面并去掉包膜防止其被污染。24h与48h后查有无细菌和霉菌。每批试管培养基污染率不得超过2%；否则，必须重做。培养基灭菌合格标准是斜面如同镜面一般光滑，无冷凝水、无麻点，无杂菌。

    保藏母种18mm×180mm硬质试管，每支可转接30～60支生产母种。在无菌区内，挑取优质菌丝体，迅速接种于试管培养基上，一点接种。25℃条件下，暗培养，20～24h菌丝开始萌动，培养10～12d菌丝体可满管。在此期间，每天检查1次。如有杂菌，甚至虽无污染，但长势不健壮的一并弃掉，严格把住菌种关。

    2 液体培养基制备及液体菌种培养

    液体菌种的生产使用天津市丰禾食用菌有限责任公司实验设备厂生产、天津师范大学化学与生命科学学院监制的FHCC-LSI-64设备。

    生产液体菌种必备的两个条件：熟练掌握无菌操作技术；菌种生产环境干燥、整洁、可控温26～28℃。

    2.1 液体培养基制备 将土豆去皮去芽，切棱形块200g，菇根适量，麦麸50g，一并放入不锈钢锅，文火煮沸30min，多层医用纱布过滤，取过滤液加葡萄糖20g，磷酸二氢钾3.0g，硫酸镁1.5g，维生素B1，4mg，将其完全溶解后，定容1000mL。制备若干，分装于40只圆形平底玻璃培养器（2000mL）中，装量为1500～1600mL，并加磁子1只，高压灭菌2h，28～30℃下接种，置电动磁力控制器上培养。

    2.2 接种与终止培养的判断 在无菌条件下，挑取试管母种菌丝体漂浮于培养器中，接种量为1支试管母种最多可接5400mL。多点接种，28℃条件下静置培养48h，待出现菌落后，置电动磁力控制器上，26～28℃条件下培养。培养液颜色由深变浅，待培养至菌丝片段既不下沉，也不上浮，与液体混为一体时，可终止培养，84～96h。此时，视为壮龄期，方可用于接种。

    2.3 液体菌种的鉴别 静置培养液体菌种48h后，或终止培养后，无菌条件下取10mL检查。一看：用放大镜看是否有赤、橙、黄、绿、青、蓝、紫等杂色，或在液体表面出现菌膜等异常现象，视为被污染；二闻：取出的培养物，若有异味，视为被杂菌污染。

    3 出菇菌棒的制作与培养

    出菇菌棒的制作：当地平均气温稳定在20℃左右开始装袋。配方：棉子壳72%，木屑13%，麦麸8%，玉米粉2%，石膏粉2%，生石灰3%，另加菜园土15%。培养基含水量60%～62%，充分拌匀，建堆发酵，并加入发菌剂，发酵料堆底宽1.2m，堆高1.0m，堆长不限。自然建堆后打孔通气孔距40～50cm。当料堆温达55℃左右时，保持48h后，进行第1次翻堆，整堆打孔覆膜。当料堆温达60～70℃时，每隔1d翻堆1次，并充分换位。共需7～8d，待料为均匀棕褐色，质地均匀，富有弹性，料味纯正，料表面有较多的放线菌时，说明料发酵成功，散堆降温，pH7.5～8.5，含水量60%可装袋。选用与栽培种相同的菌袋，菌袋培养基料柱高约20cm，加无棉塑料封口盖，6～8h内将料装完，立即灭菌。每筐竖摆共20只菌棒。0.15MPa高压灭菌2h，或常压灭菌12～14h，50～60℃出锅。32～35℃下接种，一端接种，接种量为40mL/袋，或每袋栽培种接出菇菌棒25只。栽培种的制作与培养配方：棉子壳87%，玉米粉3%，麦麸5%，石膏粉2%，生石灰3%。培养基料水比为1∶1.1～1.2，充分拌匀，闷料5～6h，迅速装袋，低压聚乙烯筒料，菌袋折径（17cm×34cm×0.05cm），装干料 550～600g。采用中间打孔的装袋机装袋，培养基料柱高约20cm，加无棉塑料盖封口，装筐灭菌。压强0.15MPa高压灭菌2h。一端接种，将菌液均匀地接种料面，接种量为 40mL/袋。25～28℃条件下常规培养，18～20d菌丝体满袋，较固体菌种缩短8～10d。在氧原子消毒器下开放式接种，一般接出菇菌棒900～1000只/人?8h。4人配组接种最佳，要做到快打口盖，快接种，快封口盖。