复合PCR是一种特殊的PCR技术，即在同一反应体系中加入多对引物，扩增多个基因片段，此法方便快捷，已广泛用于医学临床诊断。芦银华等[9]应用复合PCR，在同体系中用3条引物扩增PCV两种血清型的DNA片段，从而达到PCR扩增一次就可检测鉴别PCV-1和PCV-2的目的。试验从PK-15细胞中扩增出了PCV-1和PCV-2特异的基因片段，表明复合PCR方法的建立，为PCV的检测、分型及临床PMWS的诊断提供了有效的工具。朱军莉等[10]采用复合PCR，对浙江、上海等地的猪场，具有明显的“高热综合征”临床表现猪的淋巴结进行检测，发现PCV-2的阳性率为39.40%，而PCV-1的阳性率为33.33%。

3.4　PCR-RFLP检测

PCR-RFLP是指在生物进化过程中，DNA碱基序列发生插入、缺失或突变，从而改变了限制性核酸内切酶的识别位点，是以PCR快速有效的扩增微量的DNA，再利用限制酶进行多态性分析的试验方法。FenauxM等[11]利用PCR-RFLP对PCV-1和PCV-2进行检测和定型。根据PCV-1和PCV-2的243bp片段，利用仅在PCV-2上有的限制性酶切片段位点NcoⅠ来鉴定PCV-1和PCV-2。PCV-2的PCR产物可被NcoⅠ切成168bp和75bp的两个片段，而PCV-1上无NcoⅠ的位点，不能被NcoⅠ切割。这样就可以直接区分PCV-1和PCV-2。经电泳分析，PCV-1的酶切片段仍是243bp，而PCV-2的酶切片段是168bp和75bp。吕艳丽等[12]采用PCR从猪的淋巴结和脾脏中扩增出了预期长度的PCV-2DNA片段，再用限制性内切酶EcoRⅠ酶切鉴定了PCV-2PCR产物的特异性。

3.5　其他PCR检测

欧阳岁东等[13]报道，应用RT-PCR在福建检测发现有猪PRRSV和PCV-2共同感染。龚振华等[14]设计了针对猪圆环病毒引物的PCR试验，从细胞毒及组织中直接用水煮法提取核酸，操作简便、快速，从核酸的制备到检测出结果只需2.5h，大大缩短了检测时间。KimJ等[15]建立了固定、石蜡包埋组织中最佳DNA提取及套式PCR检测PCV-2的方法。

4　间接荧光免疫试验

将组织病料接种PK-15细胞玻片培养，丙酮固定，用兔抗PCV高免血清与细胞培养物中的PCV反应，可对PCV进行检测和定型。周继勇等[16]报道，应用间接免疫荧光技术，测定了浙江地区44个猪场2000年－2002年的2039个血清样本，对不同年龄和品种猪的血清学数据进行了系统分析。结果显示，浙江地区44个猪场均有猪圆环病毒感染，平均阳性率为58.31%，其中种猪感染的血清阳性率为59.38%，断奶以后猪感染的血清阳性率为56.65%。芦银华等[17]应用间接荧光技术对几个地区的64份临床血样进行检测，结果38份血清呈现PCV抗体阳性(59%)，表明PCV已在我国普遍流行。

5　免疫组织化学技术检测

免疫组织化学技术(IHC)是在抗原抗体特异反应存在的前提条件下，借助于酶细胞化学的手段，检测某种物质在组织细胞内存在部位的一门新技术，即预先将抗体与酶连接，再使其与组织内特异抗原反应，经细胞化学染色后，于光镜或电子显微镜下观察分析的形态学研究方法。StaeblerS等[18]利用单克隆抗体的IHC方法，对收集的469头猪的淋巴组织和回肠的石蜡标本进行研究，这种单克隆抗体是针对PCV-2ORF2遗传密码的衣壳抗体。从28个农场的39头猪的组织标本中检测出抗体。KrakowkaS等[19]通过IHC和组织病理学对感染病毒猪进行检测，确定了感染PCV-2的病毒载体，尤其是淋巴组织和肝脏，与感染PCV-2猪的临床表现严重程度有直接关系。KimJ等[20]用IHC从流产胎儿和死产仔猪的巨噬细胞中检测出PCV-2的抗原。

6　酶联免疫吸附试验

针对猪圆环病毒病血清学诊断方法，酶联免疫吸附试验(ELISA)是最主要的试验方法。McKeownNE等[21]利用ELISA，表明由母源抗体产生的对PCV-2感染的保护是由滴度决定的，高滴度产生普遍保护，而低滴度则不产生。LiuC等[22]将编码PCV-2结构蛋白(Cap)的序列克隆到杆状病毒表达载体上，并将重组表达的Cap蛋白纯化后作为ELISA的包被抗原。通过与免疫过氧化物酶单层试验的比较，发现这种ELISA方法的敏感性和特异性都非常高，同时试验表明与PCV-1、PRRSV和PPV都无任何交叉反应。殷鹰等[23]运用ELISA对来自重庆、内江两地3个猪场的89份血清样进行了PCV-2检测，发现有阳性猪场。崔尚金等采用PCV抗原和正常细胞对照抗原，建立了间接ELISA，并被农业部推荐用于流行病学调查。

7　原位核酸杂交试验

原位杂交组织(或细胞)化学技术(ISH)简称原位杂交技术，属于固相核酸分子杂交技术，它区别于固相核酸分子杂交中的任何一种核酸分子杂交技术。核酸杂交是利用核酸分子单链之间有互补的碱基顺序，通过碱基对之间非共价键形成稳定的杂交双链。KimJ等[20]用ISH检测了PCV-2的DNA。SegalesJ等[24]通过ISH得出器官损害的程度越严重，所测出的病毒基因的数量越多，在血清抽样中测出PCV-2的遗传量越高。国内对ISH的报道较少。