^[6]。Plackett等报道，曾对感染牛分支杆菌但对牛结核菌素试验没有反应的动物进行了ELISA试验检测。但因抗体试验的低敏感性，他们提议将ELISA作为结核菌素试验的补充试验。据报道，经超声处理的牛分支杆菌样品用ELISA检测发现其特异性很差，这可能是因为样品中的广泛交叉反应热激蛋白的浓度要比培养滤液蛋白高的缘故。从结核病的早期血清学试验认识到，因分支杆菌间有广泛抗原交叉反应，故特异性抗原在发生特异性抗体反应中是必要的。因牛分支杆菌的主要抗原已经分离到且序列已测出^[7]，现在很容易解释分支杆菌的早期血清学研究中的交叉反应性高的原因。除了已知的非蛋白抗原间的交叉反应外，还知道结核分支杆菌的许多主要蛋白抗原与分支杆菌属有同源性，且与很多其他菌类有同源性。Fifis等报道，一种较大的牛分支杆菌特异性蛋白（MPT70）的使用大大提高了ELISA检测牛结核病的特异性^[8]。尽管在Harboe M等的研究中MPT70的敏感性低,但他们还是支持其抗体效价和迟发性超敏反应之间是负相关性^[9]。?

在用牛分支杆菌的实验性感染过程中，虽然不同动物间反映出感染动物的数量非常不同，但发现在第19周至第28周间MPT70的抗体反应很低，然后逐渐增加。牛分支杆菌感染牛的结核菌素试验结果表明，可以诱导对MPT70的很强的免疫记忆抗体反应。几种研究表明，这种免疫记忆影响着后来的结核菌素试验，在这些研究中选用了一些结核菌素试验阳性的感染牛作为实验动物。?

为了研究MPT70-ELISA的敏感性和特异性，使用了一批经过选择的血清样，牛分支杆菌培养阳性牛109例，培养阴性牛229例，这229头阴性牛中4头在ELISA检测中呈阳性，该检测结果的特异性为98.2%；109头培养阳性牛中有54头是ELISA检测阳性，故MPT70的ELISA的敏感性为49.5%。但是该次所有使用的血清的敏感性低，是因为这些牛最近刚接受了结核菌素试验。在结核菌素试验前采集的血清是可以应用的。对32例牛分支杆菌感染牛进行MPT70-ELISA试验，仅有4例阳性，即结果是12.5%的低敏感性。这又一次证实了牛分支杆菌感染牛对结核菌素有较强的免疫记忆反应。MPT70-ELISA也在该情况下被用于检测，从牛分支杆菌感染的牛群中抽出1 362头^[10]，所有血样都在结核菌素试验前采集，这次实验得出MPT70-ELISA的敏感性是18.1%，特异性为96.4%，这么低的敏感性，可能MPT70-ELISA反应的假阳性率与交叉反应的水平相关。?

1.1 抗原检测?

抗体已被用于人的痰液，尿液和脑脊液中的分支杆菌抗原的检测。但是对兽医来说，使用这些样品是不太适用的。单克隆抗体已经被用于牛分支杆菌培养物的阳性鉴定。以每毫升10⁵ cfu的菌体浓度与ELISA相结合直接检测牛分支杆菌^[11]。惟一从牛分离出的用于体外检测牛结核的可实用的诊断样品就是痰液，此阶段的细菌水平最可能在该病发展到一定阶段时才能检测到。

1.2限 分支杆菌的免疫反应图谱?

人的主要分支杆菌病，即麻风病和结核病，通常很容易产生与因分支杆菌的生长所导致的免疫系统免疫失败相关的高水平的循环抗体。Thorns和Morris在几种动物身上重复了牛分支杆菌感染的过程，且包括长期感染的病灶，结果发现牛和人一样，大多数个体能产生有效的T细胞反应，在一些动物如鼯和獾，更频繁的发生突发的疾病，因此，发现在种内和种间存在一种相互关系，即T细胞反应性和感染部位间的关系；另一方面是抗体水平和疾病发展程度间的关系。牛结核病的血清学研究支持这个说法。细胞学试验如结核菌素、淋巴细胞增生试验和γ干扰素试验都比诊断牛结核病血清学试验更简单。从牛结核病的各种血清学的研究中得出的主要结论与从人结核病和麻风病患者的相似研究中得出的结论是一致的。动物对分支杆菌感染的较差的反应主要受血清学试验敏感性的局限，而且分支杆菌抗原间的交叉反应性也导致了高水平的假阳性反应。因为只有感染个体的一个小片段有被这些单克隆抗体识别的抗原表位，故种属特异性单克隆抗体已经用于竞争ELISA（能产生一种特异抗体的试验）中。迄今也没有诊断结核病的血清学试验被医学和兽医学实验室用于常规方法。?