传染性法氏囊效力检验:将14日龄的健康非免疫雏鸡20只,随机分为两组,每组10只,1组为对照组,不接种疫苗,2组为试验组,每只鸡滴鼻接种1个使用剂量的鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊三联弱毒冻干疫苗。分别在免疫前、免疫后7、14天翅静脉采血分离血清,用AGP法测定传染性法氏囊抗体阳性率,20天后取全部免疫鸡连同对照鸡,每只点眼攻击50个发病量的传染性法氏囊BC6-85强毒0.05毫升,72小时后剖杀所有鸡,检查法氏囊的变化。
疫苗的免疫期测定 用20只14日龄的非免疫健康雏鸡,每只颈部皮下注射鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊三联弱毒冻干疫苗0.2毫升(含1个使用剂量),于免疫后第14天开始,每间隔14天用β-微量血凝抑制试验测定血清中新城疫、传染性支气管炎的抗体滴度,用AGP法测定传染性法氏囊抗体阳性率,直至血清抗体水平降至公认的保护抗体水平。
疫苗的保存期测定 试制的鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊三联弱毒冻干疫苗经物理性状观察和实验室检验合格后,于-25℃冷冻保存;每间隔3个月免疫14日龄雏鸡10只,同时另设对照10只,于免疫后14天采血分离血清,检测鸡新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊的抗体水平,确定该疫苗的保存期。
二、试验结果
物理性状观察 冻干后的疫苗均呈微红色海绵状疏松团块,易与瓶壁脱离,加稀释液后能迅速溶解。
疫苗的无菌检验 经观察,接种疫苗的硫乙醇酸盐培养基(T.G)小管和酪胨琼脂(G.A)斜面小管及对照管在5天内均无细菌生长。
疫苗的支原体检验 在3次7天的反复培养和最后一次14天的培养中,小瓶和小管内的培养基颜色均无变黄或变红的现象,说明试制的3批疫苗均无支原体污染。
疫苗的剩余水分含量测定 从下表1可以看出,试制的3批鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊三联弱毒冻干疫苗剩余水分含量均未超过4%,合乎国标要求。
表1 鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊三联
弱毒冻干疫苗的剩余水分含量测定结果(%)
疫苗的真空度检查 用高频火花真空测定器测定,3批疫苗瓶内均出现紫色辉光,说明真空度检验合格。
疫苗的安全检验 通过14天的观察,用10个使用剂量的鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊三联弱毒冻干疫苗免疫的30只雏鸡生长发育良好、精神状况、饮食欲等均无异常表现。
疫苗的效力检验 新城疫效力检验:由下表2可见,对照组与试验组在试验前抗体水平差异不显着(P>0.05),在试验后7、14天,对照组与试验组相比,抗体水平差异极显着(P<0.01)。攻毒试验结果显示,试验组100%(10/10)保护,对照组100%(10/10)死亡。由此可见,用试制的鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊三联弱毒冻干疫苗1个使用剂量免疫接种14日龄雏鸡,7天可产生免疫力,免疫后14天对鸡新城疫强毒攻击的保护率为100%,说明该疫苗对预防雏鸡新城疫的发生是有效的。
表2 新城疫效力检验结果
传染性支气管炎效力检验:由表3可见,对照组与试验组在试验前抗体水平差异不显着(P>0.05),在试验后7、14天,对照组与试验组相比,抗体水平差异极显着(P<0.01)。攻毒试验结果显示,试验组100%(10/10)保护,对照组90%(9/10)死亡。由此可见,用试制的鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊三联弱毒冻干疫苗1个使用剂量免疫接种14日龄雏鸡,7天可产生免疫力,免疫后14天对鸡传染性支气管炎强毒攻击的保护率为100%。从而说明该疫苗对预防雏鸡传染性支气管炎的发生是有效的。
表3 传染性支气管炎效力检验结果
传染性法氏囊效力检验:由下表4可见,对照组与试验组在试验前传染性法氏囊的抗体阳性率差异不显着(P>0.05),在试验后7、14天,对照组与试验组相比,抗体阳性率差异极显着(P<0.01)。攻毒后72小时的剖检结果为,试验组10只鸡中7只法氏囊无任何肉眼可见变化,3只鸡的法氏囊有不同程度的病变,因而该疫苗的保护率为70%;而对照组10只鸡法氏囊全部不同程度的表现为:法氏囊体积和重量均增大,囊壁增厚,发黄,黏膜表面有点状出血或瘀血性出血,囊表面覆有一层胶胨样黄色渗出液,并有纵行条纹,囊腔内充满混浊粘液和干酪样渗出物,即100%发病。说明试制的鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊三联弱毒冻干疫苗对预防鸡传染性法氏囊的发生有较好的作用。
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