鸡新城疫（ND）、传染性支气管炎（IB）和传染性法氏囊病（IBD）三种传染病通常采用相应的单苗进行多次免疫，不仅费工费时，频繁免疫 接种还会引起鸡的应激反应。目前，国外已研制出鸡新城疫、传染性支气管炎和传染性法氏囊三联弱毒疫苗。近年来，国内也开展了这方面的研究工作，由于各地采用的毒株不同，制备工艺不同，病毒的培养方式也不一样，制备的鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊三联疫苗对鸡的免疫效果也不一样。

　　笔者采用鸡胚尿囊腔同胚培养新城疫Lasota株和传染性支气管炎H120株，鸡胚成纤维细胞旋转立体培养传染性法氏囊B87，将收获的含毒鸡胚尿囊液和细胞毒液通过配制比例筛选混合冻干，制备成鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊三联弱毒冻干疫苗，为了了解该疫苗的各项性能，特进行了疫苗的检测试验。

　　一、材料与方法

　　（一）材料

　　鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊三联弱毒冻干疫苗、硫乙醇酸盐培养基（T.G）、酪胨琼脂（G.A）、改良Frey培养基，由本课题组制备。

　　新城疫F48E9强毒、传染性支气管炎M41强毒和传染性法氏囊BC6-85强毒，购自中国兽医药品监察所。

　　14日龄非免疫雏鸡由本所实验鸡场提供。

　　（二）检测方法

　　物理性状观察 疫苗经冻干后，观察其颜色、疏松度，是否能与瓶壁脱落，加稀释液后的溶解度如何。

　　无菌检验 每批冻干疫苗随机抽取4支，用灭菌生理盐水稀释至原量，混合后接种硫乙醇酸盐培养基（T.G）小管及酪胨琼脂（G.A）斜面各2支，每支0.2毫升，一支置36±1℃培养；一支置25±1℃培养，另设生理盐水和空白对照管，观察3~5天。

　　支原体检验 每批冻干疫苗随机抽取4支，用灭菌生理盐水稀释至原量，混合后将5毫升疫苗混合物接种于小瓶改良Frey培养基，再从小瓶中取0.2毫升移植接种于1小管液体培养基内，将小瓶与小管同时37℃培养，每日观察培养物颜色变化。若在5~7天尚未见变化，再从小瓶中取0.2毫升移植于另1管液体培养基内，置37℃继续培养观察5~7天，如此重复3次，若无变化，在最后一次接种小管的培养物观察14天后停止观察。

　　倘若在观察期内，如果发现小瓶或任何一支小管培养物颜色出现明显变化，pH值变化达±0.5时，应立即移植于小管液体培养基和固体培养基上，观察在液体培养基中是否出现恒定的pH变化，及固体培养基上有无典型的“煎蛋”状支原体菌落。

　　剩余水分含量测定 采用真空烘干法，测定前，先将洗净干燥的称量瓶，置150℃干燥箱烘干2小时，放氯化钙罐中冷却后称重。迅速打开真空良好的疫苗瓶，将制品倒入称量瓶内盖好，在天平上称量。每批做4个样品，立即将称量瓶置于有P2O5的真空干燥箱中，打开瓶盖，抽真空（133.322~666.61Pa）加热（60~70℃）干燥3小时。然后通入经过氯化钙吸水的干燥空气，待真空干燥箱温度稍下降后，打开箱门，迅速盖好称量瓶盖，将所有称量瓶移入有氯化钙的干燥罐中，冷却至室温时称重，然后再移回到真空干燥箱内继续烘干3小时，两次烘干达到恒量，减失的重量即为含水量（每瓶制品的含水量不应超过4%）。

　　计算公式：含水量%=（样品干前重－样品干后重）/干前重×100

　　真空度检验 用高频火花真空测定器照射疫苗瓶，看是否出现紫色辉光。

　　安全性检验 每批疫苗随机抽取4支，稀释后充分混合，给30只14日龄雏鸡颈部皮下注射接种10个使用剂量，观察14天，看有无异常反应。

　　疫苗的效力检验 新城疫效力检验：将14日龄的健康非免疫雏鸡20只，随机分为两组，每组10只，1组为对照组，不接种任何疫苗；2组为试验组，每只鸡滴鼻接种1个使用剂量的鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊三联弱毒冻干疫苗。分别在免疫前、免疫后7、14天翅静脉采血，用β-微量血凝抑制试验测定血清中新城疫的抗体水平。14天后将所有鸡用10000ELD50的新城疫F48E9强毒肌肉注射1毫升/只，观察10~14天，并计算免疫鸡的保护率和未免疫对照鸡的发病死亡率。

　　传染性支气管炎效力检验：将14日龄的健康非免疫雏鸡20只，随机分为两组，每组10只，1组为对照组，不接种疫苗，2组为试验组，每只鸡滴鼻接种1个使用剂量的鸡新城疫-传染性支气管炎-传染性法氏囊三联弱毒冻干疫苗。分别在免疫前、免疫后7、14天翅静脉采血，用β-微量血凝抑制试验测定血清中传染性支气管炎的抗体水平。14天后将所有鸡用10倍稀释的IBM41强毒滴鼻，每只鸡1~2滴，观察10~14天，并计算免疫鸡的保护率和未免疫对照鸡的发病死亡率。