畜禽传染病尤其是病毒性传染病是危害养殖业的重要疾病。尽管养殖场采取严格的防疫程序，但由于病原体的易变异性，或动物伴发免疫抑制性疾病，某些传染病仍然难以控制。中兽医界向来就有“扶正即可以祛邪，祛邪即可以安正”、“扶正以固本”等说法。现代研究也表明，配合免疫增强剂可以提高疫苗的防疫效果。?

　　据文献报道，许多中药和中药成分具有免疫增强作用，具有潜在的开发前景。鉴于上述原因，在免疫前后或治疗免疫抑制性疾病的过程中使用具有免疫增强作用的中草药，可以提高疫苗的免疫效果和药物的疗效。因此，本试验观察了蓝芩注射液对机体免疫功能的影响。

　　1 材料与方法

　　1.1 试验用药及准备 蓝芩注射液由板蓝根、黄芩精制而成。试验前用生理盐水分别稀释成10 mg/ml、20 mg/ml、40 mg/ml 3种浓度的溶液，用于小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验。?

　　1.2 主要试剂 RPMI 1640培养基，Gibco公司产品，按其说明用三重蒸馏水配制后过滤除菌，分装后4 ℃保存，临用前加小牛血清（杭州四季青生物制品厂）达10％ 和常规量的双抗。伴刀豆素球蛋白（ConA），用无血清RPMI 1640培养液配成0.25 mg/ml。四甲基偶氮唑蓝（MTT），Amresco公司产品，用pH7.4的PBS配成5 mg/ml的溶液，0.22 μm的微孔滤膜过滤，避光保存。淋巴细胞分离液，上海恒信化学试剂有限公司产品，批号20031210。裂解液，二甲亚砜（DMSO），分析纯，苏州正兴化工研究院产品。

　　1.3 主要仪器 DG?3022型酶联免疫检测仪，国营华东电子管厂产品；CO?2培养箱，美国Revco公司生产；XSZ?D?2型倒置显微镜，重庆光学仪器厂生产；75?2A型微量振荡器，上海医用分析仪器厂生产；722光栅分光光度计，上海第三分析仪器厂生产；96孔细胞培养板和6孔细胞培养板，德国Nunclon公司生产。?

　　1.4 对淋巴细胞转化的影响?

　　1.4.1 动物分组与处理 1月龄长白猪20头，随机均分为4组，3个试验组分别注射蓝芩注射液，?1.5 ml/kg?、1.0 ml/kg、0.5 ml/kg体重，对照组注射1.0 ml/kg体重生理盐水，每天1次，连续3天。

　　分别于试验前1天、末次用药后第3、6、9天无菌前腔静脉采血，5 ml/只，肝素抗凝，测定淋巴细胞转化。?

　　1.4.2 淋巴细胞活性测定 用MTT法。将抗凝血样用Hank′s液稀释1倍，小心加在淋巴细胞分离液上层，2 000 r/min离心20 min，吸取中间云雾状白细胞层，用无血清RPMI 1640营养液洗2次，?1 500 r/min?离心15 min。活细胞计数后，用RPMI 1640 培养液调整细胞浓度为2.5×10?6个/ml，加入到96孔细胞培养板中，80 μl/孔，每孔再加20 μl ConA每个样品重复4孔，然后置于37 ℃、5% CO?2培养箱中培养44 h，〖JP〗每孔加MTT 20 μl，继续培养4 h后，每孔加裂解液100 μl，将细胞板置于微量震荡器上震荡?5 min?使沉淀完全溶解，在酶联免疫仪上检测570 nm处的吸光（OD570?）值，作为淋巴细胞转化的指标。

　　计算4孔平均值和标准差，用SPSS软件统计分析，比较淋巴细胞转化情况。试验组OD值显著大于对照组，表明中药显著促进淋巴细胞转化；反之则表明显著抑制淋巴细胞转化。1.5 对腹腔巨噬细胞吞噬作用的影响?

　　1.5.1 动物分组与处理 小鼠24只，购自江苏省农业科学院，平均体重20±2 g，雌雄各半。随机均分为4组，3个试验组分别皮下注射不同浓度的蓝芩注射液稀释液0.5 ml，分别相当于5 mg/只、10 mg/只、20 mg/只；对照组注射等量生理盐水，每天1次，连续3天。于末次给药后24 h测定腹腔巨噬细胞吞噬活性。?

　　1.5.2 巨噬细胞吞噬中性红的测定 巨噬细胞制备、纯化、培养及吞噬中性红的测定参照文献。巨噬细胞浓度4×106/ml，中性红生理盐水浓度0.1%，每孔加细胞溶解液2 ml。用722光栅分光光度计测定540 nm处的吸光(OD540?)值。?

　　2 结果与分析

　　2.1 对淋巴细胞活性的影响 见表1。?

　　由表1可见，除0.5 ml/kg体重组在给药后D?9时的OD值与对照组差异不显著外，其余各试验组均显著大于相应对照组，说明蓝芩注射液具有良好的促进ConA诱导的猪外周血T淋巴细胞转化的作用，且以中剂量的效果最佳。


　　表1 各组OD值的动态变化

　　剂量（ml/kg体重） 试验前 给药后

D3 D6 D9
1.5 0.115±0.005a 0.183±0.018b 0.273±0.045b 0.158±0.038ab
1.0 0.125±0.009a 0.375±0.038a 0.320±0.008a 0.195±
0.01a
0.5 0.117±0.052a 0.195±0.069b 0.193±0.047c 0.143±0.0
22bc
0 0.120±0.008a 0.128±0.009c 0.123±0.009d 0.110±0.001