（ 3 ）固定液量要充足，一般要 20 倍于组织的量，量太少会造成固定液浓度降低。
　　（ 4 ）组织固定后应充分水洗，去除固定液，以减少固定液造成的人为假象。固定时间最好以完全浸透为宜（ 12h~72h ），固定时间过久可能会影响染色效果。
　　（四）组织的脱水、透明、浸蜡
做石蜡切片的组织需经固定、脱水、透明、浸蜡和石蜡包埋，才能制备出薄片。整个操作过程中要掌握的原则是：脱水透明要够而不过，浸蜡的温度不宜超过 64 ℃ ，否则一是可能使抗原活性下降，降低检出率，另外还可能造成组织焦脆，焦脆的组织切片困难，即使勉强切下来了，染色过程中也极易脱片，且染色效果不好。具体程序如下：

组织脱水、透明、浸蜡程序

液缸号液体种类处理时间处理温度脱
水170%酒精2小时室温 280%酒精2小时室温 390%酒精2小时室温 4无水酒精2小时室温 5无水酒精2小时室温 6无水酒精3小时室温 7无水酒精3小时室温 透
明8二甲苯或氯仿 1小时室温 9二甲苯或氯仿1小时室温 10二甲苯或氯仿1小时室温 浸
蜡11石蜡30分60℃12石蜡30分60℃13石蜡30分60℃14石蜡30分60℃

从蜡缸拿出后用石蜡进行包埋。

　　（五）切片
　　1.载玻片的预处理 载玻片的处理是做好免疫组化染色的重要步骤，尤其对一些需做酶消化、微波或高压处理、 PCR 扩增的组织切片更为重要，目前常用的防脱片剂有以下几种：
　（ 1 ） APES （ 3- 氨丙基三乙氧硅烷） 它可以和组织、玻片上的氢键形成共价键。用甲醇 / 丙酮配成 2% 浓度使用。 APES 使用方便，便于大量应用，且价格便宜。
　（ 2 ） 1% 铬明矾明胶
　（ 3 ）白胶
　（ 4 ）多聚左旋赖氨酸 粘贴较紧，可用于多种组织化学、原位核酸分子杂交等。但其价格较贵。
　　2.切片
用石蜡切片机将包埋有组织的蜡块切成薄片，切片厚度一般 3—5μm ，除脑组织等细胞量较少的组织外，切片要尽可能薄， 45 ℃ 水温展片，要尽量展平，否则皱褶处易出现非特异染色。 55~60 ℃ 温箱烤片 2 小时，防水密封，低温保存备用。

点击支持一下 共有条评论 抗原 免疫 处理 脱水