温度是鸡胚发育的首要条件，发育中的鸡胚对环境温度最为敏感。孵化机类型不同，要求的孵化温度也不同。立体孵化机，以37.8-38为宜，平面孵化机大约比立体孵化机高0.25。胚龄不同，孵化温度不同，种蛋入孵第4天，每个鸡胚产热为1.63焦耳，19日胚龄高达376.2焦耳。随胚胎发育蛋温逐渐升高，10、15、20和21日胚龄，依次比孵化机温度高0.4、1.3、1.9和3.3。
由于孵化前期胚胎产热少，此时稍高而平稳的温度37.8-38.0可增强糖代谢，促进胚胎的萌动发育。若此时孵化温度过高，尤其在2-3日胚龄，易使心搏紧张，血管过劳导致血管破裂，形成血圈蛋的死胚。后期胚胎的产热量大，应将温度降至37.5-
37.0为宜。
入孵方式不同，用温制度不同。整批入孵时，应采用变温孵化，1-11、12-18和19-21日胚龄，适宜的孵化温度依次为37.8、37.6和37.5-37.0。分批入孵，即一个孵化机内有不同胚龄种蛋时，宜采用恒温孵化。1-18日胚龄和19-21日胚龄时的孵化温度分别为37.8和37.4-37.0。季节不同，孵化温度不同。
定温要准确，在孵化前应对所用温度计进行校正，合格者方可使用。