种母鸡在180日龄，产蛋率达到5%时，就可以进行人工授精，一般每只母鸡每隔5天输精1次，输精时间在每天下午1600产蛋后进行，输精时由2～3人操作，其中一人输精，另外1～2人翻肛。
翻肛人员右手抓住母鸡腿的基部，左手拇指与其他四指自然分开放在母鸡腹部左侧，从肛门向头前方挤压，掌心用力，借腹部压力便可翻出输卵管口，输精员用消毒吸管吸取已被稀释的精液0.03～0.05ml，向位于泄殖腔左侧的输卵管口插入，滴管插入阴道不宜过深，一般没过精液的高度即可（大约1～2cm），同时翻肛员左手迅速放开肛门，精液即可输入。输精员每输完
1只母鸡后，都要用消毒药棉擦净输精滴管口。翻肛人员左手抓住母鸡鸡尾。向上提起，拉至笼门口。右手紧贴泄殖腔向下抓起腹部，增加腹压，使泄殖腔外翻，暴露出输卵管口。输精人员将吸有精液的移液器吸嘴插入输卵管口2～3cm，将精液挤入输卵管内，移液器沿输卵管口上壁拔出。抓鸡人员松开右手，左手将母鸡推回笼内。输精后的吸嘴用脱脂棉擦拭，再吸入精液等待给下1只母鸡输精。