1.2.2 细菌分离 将病料分别接种于营养琼脂培养基和10%兔鲜血琼脂培养基，在需氧、厌氧条件下37℃培养24h；接种改良布氏琼脂培养基，在10% CO₂条件下37℃培养2周；同时种10%兔鲜血琼脂培养基、巧克力琼脂培养基，在85% N₂、10% CO₂和5% O.2的微需氧条件下25℃培养48h。观察细菌生长情况。

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1.2.3 细菌纯培养 从初次分离培养的平板上挑取可疑菌落进行涂片镜检及初步鉴定，如果细菌为弯曲的杆状、革兰氏染色阴性、氧化酶和过氧化氢酶阳性、呈螺旋或投标式运动，则进行纯分离培养。?

1.2.4 细菌鉴定?

1.2.4.1 呼吸需求试验 将细菌纯培养物重新接种于10%兔鲜血琼脂培养基，分别在需氧和10% CO₂条件下37℃培养48 h；在含85% N^₂、10% CO₂和5% O₂的微需氧条件下25℃培养48h，观察细菌的生长情况。

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1.2.4.2 生长试验 甘氨酸生长试验、NaCl生长试验、胆汁生长试验以及温度生长试验按参考文献进行。将分离菌株接种于培养基后，在微需氧条件下培养72h，观察纪录结果。?

1.2.4.3 生化试验 氧化酶、过氧化氢酶试验按何晓青等介绍的方法进行。硫化氢产生试验：三糖铁接种法按参考文献介绍的方法进行；醋酸铅纸条法按参考文献介绍的方法进行。其他生化试验均按常规方法进行。分离菌株接种培养基后置25℃微需氧条件下培养48～72h，观察纪录结果。

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1.2.4.4 运动力检查 将无菌生理盐水滴于载玻片上，挑取纯培养的单个菌落，于盐水中混匀后加上盖玻片，在油镜下观察运动性。?

1.2.5 药物敏感试验 将血平板上的纯培养物用生理盐水洗下，适当稀释，吸取0.2 ml滴于血平板上，用L棒涂平，贴上药敏纸片，置于25℃微需氧条件下培养48 h。?

1.2.6 动物感染试验?

1.2.6.1 小鼠接种试验 用生理盐水将血平板上的培养物洗下，混匀。选择16-20g小鼠8只，分别于尾静脉、腹腔各接种2只，每只接种细菌约10¹⁰CFU/ml，同时分别以生理盐水作为对照，观察1周。

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1.2.6.2 鸡胚接种试验 用生理盐水将血平板上的培养物洗下、混匀，以原液5倍、10倍稀释菌液分别接种于12日龄的鸡胚尿囊腔，每个稀释度接种4枚鸡胚，每胚接种0.1 ml，同时以生理盐水作对照。然后于37℃继续孵化。每天照蛋，24h以内死亡鸡胚弃去，24 h以后死亡鸡胚取出，直至第5天，全部取出。观察并记录鸡胚情况。?

2 结果 ?