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猪的冷冻精液技术研究进展


  1949年英国Polge等发现甘油(丙三醇)对牛精子具有抗冻保护作用,1956年开始应用这个原理进行猪精子的冷冻操作,但在1950~1960期间的研究结果中,冷冻保存、解冻后的精子具有活力,但无法获得受胎结果。虽然在1970之前有几例猪的冻精成功受胎的报道,但其结果不能被重复。1970年开始,Polge 等学者利用外科腹腔授精法将解冻后的精子直接注入输卵管而获得83%的受精卵,其后,多个研究小组如美国的Crabo and Einarsson 1971; Graham et a1 1971; Pursel and Johnson 1971;法国Paquignon du Mesnil du Buissson 1973; 澳洲Salamon Visser (1972,1973,1974)和德国的Westendorf et al (1975)相继报道了以常规的子宫颈输精并成功分娩的冻精技术试验结果,终于阐明低温保存后猪的精子仍具有受精的能力。从此,世界学者为了把猪的冷冻精液技术应用到养猪生产实践中作了许多努力,并对操作程序进行不断优化。迄今为止,人们仍沿用细管(Westendorf et a1 1975) 、颗料(Pursel and Johnson 1975)及其改良型保存装置进行猪精子的冷冻和保存。虽然冻精仍保持一定的受精能力,但产活仔数、受胎率等繁殖结果明显低于液态保存精液(Johnson 1985)。因此,采用长效、低成本、切合实际的液态保存精液技术得到了不断的改进,可以部分解决国际间遗传物质的交流,受胎率也很接近自然交配结果。所以,即使冻精的繁殖效果与液态保存精液达到相似的程度,也不会取代液态保存精液技术的广泛应用地位。所以,猪冷冻精液技术在未来养猪业中的普遍应用的价值仍存在不断地争议之处。

三、冷冻保存方式

  在一些早期研究中,猪的精子采用玻璃瓶(Polge 1956)或玻璃试管(Settergren 1958) 和较高浓度的甘油溶液进行冷冻保存。后来,牛的粒状干冰方法被应用到猪上(Nagase and Niwa 1963),把甘油溶液浓度降到1~3%的范围,可以执行快速冷冻降温操作 (Purse1 and Johnson 1975)。公猪精子采用5ml大容量保存 (Westendorf et a1 1975), 4-5 ml 铝袋(Waide et a1 1975), 0.5 ml 中型细管 (Fazano 1986, Baron 1986, Leps 1988), 1.7-2.0 mL 扁平大容量细管(Leps 1988, Moura 1988, Ewert 1988, Stampa 1989, Wegmann 1990, Simmet 1993), 和 0.25 mL 微型细管, 和不同类型的5 mL 塑料袋 (Larsson et a1 1976, 1991b, Mwanza and Rodriguez-Martinez 1993, 1996)。所有这些保存类型既有它的优点又有它的缺点。颗粒和0.25 、0.5 mL小型细管有较大的表面积/容量比,是适合低温冷冻保存的形状。然而颗粒的冷冻精液较难进行不同头份/来源的区别,容易造成交叉污染且不易解冻。1头份一般需要解冻10-20 根小型细管或2-3 根扁平细管,这是造成普遍推广应用的首要障碍。5 mL 的大型细管具有1头份的精子数量,但其表面积/容量比较小,限制了理想的冷冻和解冻过程(Weitze et a1 1987)。对塑料袋包装的测试结果一直表明能均匀地冷冻和解冻,并含有1头份精子数量,但其体积太大,不适合放置在液氮罐里保存,因此无法采用。虽然5 mL大型细管Maxi-straw保存精子解冻后活力略低,但在实践中易于操作,比颗粒的使用更加广泛(Almlid and Hofmo 1996), 主要原因是不会引起交叉污染和在使用现场更方便解冻。一些学者证实:微型、小型、中型细管,扁平细管和塑料袋保存的冻精样品经解冻后,比大型细管在精子直线运动、顶体完整性、活力方面均表现得更加优良(详见Simmet 1993综述)。大型细管Maxi-straw保存的精子活力低主要原因是位于细管中间的精子受冷不均匀,但从受精率考虑,活力并不是决定性因素,因为一些学者报道了大型、中型、扁平的大型细管保存的冻精受精率无明显的差异(Fazano 1986 and Stampa 1989)。尽管资料显示利用扁平细管或5 ml塑料袋保存的冻精与大型细管Maxi-straws相比有更高的受精力、输卵管富余精子更多,但这些保存方法在生产实践中均没有被推广使用(Simmet 1993) (Bwanga et a11991b)。在目前的实践应用中,仍以传统的颗粒或细管冻精为基础。



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