此外,本病还可引起产仔瘦小、弱仔,母猪发情不正常,久配不孕等症状。对公猪的受精率或性欲没有明显影响。
4病变
眼观病变为母猪子宫内膜有轻微炎症,胎盘有部分钙化,胎儿在子宫有被溶解、吸收的现象。感染胎儿还可见充血、水肿、出血、体腔积液、脱水(木乃伊化)及坏死等病变。
组织学病变为母猪的妊娠黄体萎缩,子宫上皮组织和固有层有局灶性或弥散性单核细胞浸润。感染胎儿死亡后可见多种组织和器官有范围广泛的细胞坏死、炎症和核内包涵体。在大脑灰质、白质和软脑膜偶以增生的外膜细胞、组织细胞和浆细胞形成的血管套为特征的脑膜脑炎变化,一般认为这是本病的特征性病变。
5诊断
如果发生流产、死胎、胎儿发育异常等情况而母猪没有明显的临床症状,同时有其他证据可认为是一种传染病时,应考虑到本病的可能性。但最后确诊必须依靠实验室检查。可将一些木乃伊化胎儿或这些胎儿的肺送实验室进行诊断。大于70日龄的木乃伊化胎儿、死产仔猪和初生仔猪则不宜送检,因其中可能含有干扰检验的抗体。
本病应注意与猪伪狂犬病、猪乙型脑炎和布鲁氏病等鉴别诊断。
6防制
本病尚无特效的治疗方法。主要采取的措施:控制带毒猪传人猪场。在引进猪是应加强检疫,当抗体滴度在1∶256以下或阴性是方可准许引进。引进猪应隔离饲养2周后,在进行一次抗体测定,证实是阴性者,方可与本场猪混饲。一旦发病,应将发病母猪、仔猪隔离或淘汰。所有猪场环境、用具应严密消毒,并用血清学方法对全群猪进行检查,对阳性相猪应采取隔离或淘汰。以防进一步发展,对猪进行免疫接种,有良好的预防效果。美国一研制成弱毒疫苗和灭活苗,对初产母猪进行免疫接种,能有效预防母猪感染细小病毒。灭活苗免疫期可达4个月以上。我国已研制出灭活疫苗,在母猪配种前1~2个月左右免疫,可预防本病发生。仔猪的母源抗体可持续14~24周,在抗体效价1∶80是可抵抗猪细小病毒感染,因此,在断奶时将仔猪从污染猪群移到没有本病污染的地区饲养,可以培育出血清阴性猪群。
综合以上种种,鉴于细小病毒危害的严重性和临床症状的不明显性,早期诊断是预防的关键,所以找寻一种简便、准确的实验室诊断方法将是我们所要解决的首要问题。
目前,我们已经建立了许多种细小病毒的诊断方法。主要包括(1)病原学方面:进行病毒的细胞培养和鉴定或血凝实验或荧光抗体染色实验。用荧光抗体检查病毒抗原是一种可靠和敏感的诊断方法。但其需要荧光显微镜这一特殊的设备,因此限制了该方法在临床的推广。
(2)血清学方面:血清中和实验、血凝抑制实验、酶联免疫吸附实验、琼脂扩散实验和补体结合实验等,都可用于检测本病毒的体液抗体。其中常规诊断方法是血凝抑制实验。病料可采取母猪血清,也可用70日龄以上感染胎儿的心血或组织浸出液。被检血清先经56℃30灭活,加入50%豚鼠红细胞(最终浓度)和等量的高岭土,摇匀后放室温15min,经2000r/min离心10min取上清,以除掉血清中的非特异性凝集素和抑制因素。抗原用4个血凝单位的标准血凝素,红细胞用0.5%豚鼠红细胞悬液。判定标准暂定1∶256。但其存在一定的不足之处,如实验所需的红细胞要现配现用,最多只能保存1周,被检血清的处理也较为烦琐。
可见,使用方便、经济适用、简单易行、准确可靠,适应规模化养殖的早期诊断和及时预防的需要的鉴别诊断方法为人们众望所归。为此,华中农业大学病毒研究室研制开发出猪细小病毒鉴别诊断试剂盒。
7诊断试剂盒研制的生物学基础
细小病毒作为最小最简单的一类单链线状DNA病毒,具独特的基因结构,其中多种自主型细小病毒的基因组结构非常相似。PPV具有细小病毒的一般特性,其基因组为单链线状负性DNA。其两端均为发夹结构,3’端102个碱基的回文序列被2个大小约10个碱基的短回文序列间隔,从而形成“Y”形结构,而5’端127个碱基的回文序列,被24个碱基的短回文序列间隔,折叠成“U”形结构。PPV基因组含有两个互不重叠的主要开放阅读框架(OpenReadingFrame)。位于3’端的主要编码病毒结构蛋白(VP,VP2);5’端的主要编码病毒的非结构蛋白(NSl,NS2,NS3)。非结构蛋白的功能表现为:
(1)非结构蛋白在细小病毒DNA复制和RNA转录过程中具有重要作用,NSl蛋白具有内切酶作用和共价结合5’端序列的特性,从而能共价结合复制型DNA5’末端并具有特意部位的解链活动。NSl蛋白有A型保守序列,这类序列是与ATPase和GTPase相关的ATP和GTP结合位点,并具有解旋作用,它拓展了病毒DNA的末端的空间构型,起始病毒DNA的复制,所以NSl蛋白是细小病毒DNA复制所必需的。
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