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猪细胞巨化病毒性感染



   
  胎儿感染无肉眼可见的特征性病变。

  病理组织学 
    
  较大猪中上皮组织的广泛性感染与胎儿或新生仔猪的网状内皮组织全身性感染是不同的。在较大猪的鼻黏膜腺、副泪腺及泪腺的腺泡和导管上皮、肾小管上皮中,可见到特征性的嗜碱性核内包涵体及巨细胞,在这些组织中可能有大量的细胞被感染。在食管的黏膜腺、附睾管、输精管、十二指肠和空肠黏膜的上皮细胞中也见到少量的包涵体。在这些病变部位,淋巴细胞、浆细胞和巨噬细胞浸润于感染的上皮组织周围,并侵入腺泡。在腺泡损伤处,由导管增生的鳞状上皮取而代之,在鼻甲骨黏膜中有局灶性淋巴组织增生。肾表现为间质性肾炎的病变。在中枢神经系统可见到稀少的局灶性胶质细胞增生,有 时在胶质细胞中可看到包涵体。 
    
  在引起胎儿感染的急性致死性综合征中,包涵体多见于毛细血管内皮细胞和窦状隙细胞中,故在所有淋巴和实质组织中均可发现包涵体。上皮损伤造成局部水肿、出血,巨噬细胞和红细胞渗出到扩张的细胞外间隙中。在血管和脾脏可见到含有包涵体的单核细胞,肺泡组织中则以感染的巨噬细胞为主。在肝细胞内的病毒复制造成肝脏局灶性坏死,在肾脏,包涵体多见于分化的肾组织和肾小球毛细血管内皮。出血和胶质细胞增生遍及整个中枢神经系统,尤其是在脉络丛、小脑和嗅叶。野外暴发时,由于并发感染而使病变更为复杂化。据报道,这 些感染有黏液性?化脓性鼻炎、肺炎和肠炎等。?

  5 实验室诊断?

  呈现传染性鼻炎症状的仔猪,特别是1~3周龄的患鼻炎病猪,要考虑到发生本病的可能性。 对表现出类似SMEDI综合征的繁殖障碍母猪,必须同细小病毒、猪腺病毒以及伪狂犬病毒感染猪做出鉴别诊断。本病毒感染在上皮细胞内形成巨大的嗜碱性核内包涵体和不引起流产, 与上述疾病有不同之处。

  5.1 病毒分离与鉴定 
    
  怀疑猪群中是否有PCMV感染,可采集胎儿或新生仔猪的鼻汁,或鼻腔、喉头、结膜等拭子以及肺、肾、淋巴结等材料,接种肺泡巨噬细胞或输卵管类成纤维细胞,进行病毒分离,也可以用肺泡巨噬细胞直接培养分离病毒。接种病料后培养 7~14天, 观察细胞病变。 用荧光抗体染色检查细胞核内包涵体出现情况,或检查细胞浆内的荧光抗原。如用已知标准毒株的免疫血清,以标准的病毒培养物为对照,对分离毒株进行中和试验,可对病毒分离物予以鉴定。病毒的形态观察和理化学特性检查,也有一定参考价值 。电镜检查在感染的细胞核和细胞浆内(主要为空泡内)能发现结晶状排列的病毒。 

  5.2 组织病理学检查 
    
  对于全身感染的病猪,可采取鼻黏膜或其刮削物作组织染色标本检查,根据在鼻黏膜管状腺见到特征性成丛的膨大细胞及嗜碱性核内“鹰眼形”包涵体,不难作出诊断 。也可根据组织切片中的嗜碱性核内包涵体和巨细胞检查,或作冰冻切片,用免疫染色法检测病毒抗原,继而作出诊断。在急性感染的幼龄仔猪肾和脑等组织, 也可见到这种包涵体。

  5.3 血清学试验 

  血清抗体是确证猪群中存在PCMV最可信的方法,本法也可以用于对剖腹产猪进行监测。对育肥猪随机采取血清样品做间接免疫荧光试验或者 ELISA试验测定,将感 染病毒的肺泡巨噬细胞或类成纤维细胞用丙酮固定,然后进行间接荧光抗体染色法检查,其试验敏感性比病毒中和试验至少高 8倍,而且还可对不同类别的IgG和IgM抗体予以鉴别。人 工感染后 3周可检出抗体,6周后达最高值并一直持续到屠宰。现场猪的抗体效价多为64~12 8倍。也可应用感染的输卵管类上皮细胞作ELISA,它与间接荧光抗体具有相同的敏感性。现场猪 在 2~3周龄感染病毒,血清抗体在5~6周龄转阳,并呈终生持续感染。Tajima等(1994)以血 纸法建立了ELISA法,并将全血法与血清检法的抗体效价进行了比较,样品的吸收值高度相 关(r=0.88),对26份田间收集血纸的检查,发现这些仔猪出生后8周母源抗体水平下降,并 从 4头猪中检出IgM抗体。 

  PCR技术 Hamel等(1999)首次报道了应用PCR诊断本病,采用直接从具有不同临床综合征的病猪肺和鼻黏膜的刮削物提取 DNA检查的方法,从126份样品中检出59份阳性样品,该方法有 可能成为PCMV检查和监测的常规方法。之后,Fryer等(2001)用定量竞争PCR对 不同的猪器官(包括用于异种移植供体)进行了病毒的检测,可以从每微克DNA中检出低于10 至 97个基因组拷贝。?


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