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南京某奶牛场子宫内膜炎病原菌分离鉴定及药敏试验


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子宫内膜炎是奶牛易患的一种生殖系统疾病,不仅影响其正常生理功能,还会导致其长期不能正常怀孕,有时还会继发其他生殖系统疾病造成终生不孕。美国每年因奶牛不孕症造成的经济损失近2.5亿美元,英国不孕牛中约95%是由于子宫内膜炎引起,1980-1985年间成年奶牛子宫内膜炎发生率平均为37%;在国内,奶牛子宫内膜炎发生率也很高,1981-1987年成年奶牛子宫内膜炎发生率平均为18.97%。由此可见,奶牛子宫内膜炎所造成的繁殖和经济损失是相当严重的。该病主要是由病原微生物侵入奶牛子宫而引起子宫黏膜的炎症。在临床上遇到奶牛子宫内膜炎病例时,用一般的抗生素治疗疗效不佳。因此,笔者首先采集疑似例的子宫分泌物并进行细菌的分离鉴定,得到最常见的几种病原微生物,并进一步做常用抗生素对分离细菌的敏感性试验,筛选出对这些致病菌比较敏感的几种药物,以期指导临床上治疗该病时的用药选择。?

1 材料与方法 ?

1.1 培养基制备及生化鉴定管 营养肉汤、血清肉汤、普通营养琼脂、血清琼脂、鲜血琼脂、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂、三糖铁琼脂、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水和枸橼酸盐培养基等均参考文献制备。葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、蕈糖、七叶苷、血清菊糖、山梨醇、淀粉、精氨酸脱羧酶、胆汁溶菌、马尿酸盐、明胶、0.1%美蓝牛乳、6.5%高盐肉汤、40%胆汁肉汤和O/F培养基,均购自杭州天和微生物试剂有限公司。?

1.2 药敏纸片 青霉素G、氨苄青霉素、阿莫西林、四环素、强力霉素、链霉素、庆大霉素、新霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素、恩诺沙星、环丙沙星、氟哌酸、氟嗪酸、红霉素、罗红霉素、林可霉素、复方新诺明和氯霉素,均购自杭州天和微生物试剂有限公司。?

1.3 病料采集 根据奶牛临床型子宫内膜炎的诊断标准 ,从南京某奶牛场选择

典型病例,病牛阴户用温水清洗、0.2%新洁尔灭消毒后,按直肠把握法用输精管抽取子宫分泌物1~5 ml放入无菌试管中,尽快送回实验室进行细菌培养鉴定。?

1.4 细菌分离鉴定 将病料接种于麦康凯琼脂,37℃培养24~48 h后,挑取单个呈中等大小的红色菌落,转接普通营养肉汤,37℃培养24 h左右,待肉汤变混浊后转接营养琼脂斜面,37℃培养24~48 h后染色、镜检,呈革兰氏阴性、两端钝圆的短杆菌者,按大肠杆菌鉴定方法分别接种伊红美蓝琼脂,进行三糖铁、葡萄糖、乳糖、麦芽糖和蔗糖发酵试验,明胶水解试验,V-P试验,靛基质试验,甲基红试验,枸橼酸盐利用试验等。将分离到的大肠杆菌接种血液琼脂观察其溶血情况。挑取血液琼脂平板上呈圆形、隆起、表面光滑、边缘整齐的单个菌落,转接普通肉汤,37℃培养24 h左右,待肉汤变混浊后转接营养琼脂斜面,37℃培养24~48 h后染色、镜检,呈革兰氏阳性、葡萄串状、成双或单个排列且触酶阳性者,按葡萄球菌鉴定方法进一步做凝固酶试验,甘露醇、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、O/F、淀粉发酵试验,明胶水解试验,40%胆汁培养试验,V-P试验等。挑取血液琼脂平板上直径为0.1~1.0 mm、灰白色、表面光滑、隆起、边缘整齐、闪光的小


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