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子宫内膜炎是奶牛易患的一种生殖系统疾病，不仅影响其正常生理功能，还会导致其长期不能正常怀孕，有时还会继发其他生殖系统疾病造成终生不孕。美国每年因奶牛不孕症造成的经济损失近2.5亿美元，英国不孕牛中约95%是由于子宫内膜炎引起，1980-1985年间成年奶牛子宫内膜炎发生率平均为37%；在国内，奶牛子宫内膜炎发生率也很高，1981-1987年成年奶牛子宫内膜炎发生率平均为18.97%。由此可见，奶牛子宫内膜炎所造成的繁殖和经济损失是相当严重的。该病主要是由病原微生物侵入奶牛子宫而引起子宫黏膜的炎症。在临床上遇到奶牛子宫内膜炎病例时，用一般的抗生素治疗疗效不佳。因此，笔者首先采集疑似例的子宫分泌物并进行细菌的分离鉴定，得到最常见的几种病原微生物，并进一步做常用抗生素对分离细菌的敏感性试验，筛选出对这些致病菌比较敏感的几种药物，以期指导临床上治疗该病时的用药选择。?

1 材料与方法 ?

1.1 培养基制备及生化鉴定管 营养肉汤、血清肉汤、普通营养琼脂、血清琼脂、鲜血琼脂、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂、三糖铁琼脂、蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水和枸橼酸盐培养基等均参考文献制备。葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、蕈糖、七叶苷、血清菊糖、山梨醇、淀粉、精氨酸脱羧酶、胆汁溶菌、马尿酸盐、明胶、0.1%美蓝牛乳、6.5%高盐肉汤、40%胆汁肉汤和O/F培养基，均购自杭州天和微生物试剂有限公司。?

1.2 药敏纸片 青霉素G、氨苄青霉素、阿莫西林、四环素、强力霉素、链霉素、庆大霉素、新霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素、恩诺沙星、环丙沙星、氟哌酸、氟嗪酸、红霉素、罗红霉素、林可霉素、复方新诺明和氯霉素，均购自杭州天和微生物试剂有限公司。?

1.3 病料采集 根据奶牛临床型子宫内膜炎的诊断标准 ，从南京某奶牛场选择

典型病例，病牛阴户用温水清洗、0.2%新洁尔灭消毒后，按直肠把握法用输精管抽取子宫分泌物1～5 ml放入无菌试管中，尽快送回实验室进行细菌培养鉴定。?

1.4 细菌分离鉴定 将病料接种于麦康凯琼脂，37℃培养24～48 h后，挑取单个呈中等大小的红色菌落，转接普通营养肉汤，37℃培养24 h左右，待肉汤变混浊后转接营养琼脂斜面，37℃培养24～48 h后染色、镜检，呈革兰氏阴性、两端钝圆的短杆菌者，按大肠杆菌鉴定方法分别接种伊红美蓝琼脂，进行三糖铁、葡萄糖、乳糖、麦芽糖和蔗糖发酵试验，明胶水解试验，V-P试验，靛基质试验，甲基红试验，枸橼酸盐利用试验等。将分离到的大肠杆菌接种血液琼脂观察其溶血情况。挑取血液琼脂平板上呈圆形、隆起、表面光滑、边缘整齐的单个菌落，转接普通肉汤，37℃培养24 h左右，待肉汤变混浊后转接营养琼脂斜面，37℃培养24～48 h后染色、镜检，呈革兰氏阳性、葡萄串状、成双或单个排列且触酶阳性者，按葡萄球菌鉴定方法进一步做凝固酶试验，甘露醇、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、O/F、淀粉发酵试验，明胶水解试验，40%胆汁培养试验，V-P试验等。挑取血液琼脂平板上直径为0.1～1.0 mm、灰白色、表面光滑、隆起、边缘整齐、闪光的小菌落，转接于血清肉汤中，37℃培养24 h左右，待血清肉汤变混浊后转接血清琼脂斜面，37℃培养24～48 h后染色、镜检，呈链状排列的革兰氏阳性球菌且触酶阴性者，按链球菌鉴定方法进一步做甘露醇、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、淀粉、七叶苷、山梨醇、蕈糖、血清菊糖等发酵试验，精氨酸、马尿酸盐、明胶水解试验，40%胆汁培养试验，60℃ 30min、45℃培养试验，牛乳美蓝试验，胆汁溶菌试验等。?

1.5 抑菌试验 将分离鉴定的大肠杆菌和葡萄球菌分别接种于肉汤培养基，链球菌接种于血清肉汤培养基，37℃培养24 h，适当稀释后吸取150 μl加到普通琼脂（大肠杆菌和葡萄球菌）和血清琼脂（链球菌）平板内，用“T”形涂布棒涂匀，再用无菌镊子将19种药敏纸片分别贴到平板上，37℃培养24 h后测量抑菌圈直径。抑菌圈直径小于10 mm为耐药， 10～15 mm为中度敏感，15 mm以上为高度敏感。?

2 结果与分析 ?

2.1 细菌分离鉴定情况 从25份病料中共分离到10株葡萄球菌，阳性率为40％（10/25）；6株链球菌，阳性率为24％（6/25）；4株大肠杆菌，阳性率为16％（4/25）。其中感染一种细菌的13例，感染两种细菌的3例，感染3种细菌的1例。说明大肠杆菌、葡萄球菌和链球菌为该奶牛场子宫内膜炎的主要致病菌。?

2.2 抑菌效果 大肠杆菌对丁胺卡那霉素、卡那霉素、新霉素和氯霉素均高度敏感。金黄色葡萄球菌除对林可霉素耐药、对氨苄青霉素、青霉素和阿莫西林敏感外，对其余15种药物均高度敏感；表皮葡萄球菌除对链霉素和林可霉素敏感外，对其余17种药物均高度敏感。无乳链球菌除对四环素耐药、对强力霉素敏感外，对其余17种药物均高度敏感；乳房链球菌对氟哌酸、氟嗪酸、恩诺沙星、环丙沙星、青霉素、氨苄青霉素、阿莫西林和氯霉素均高度敏感。几种细菌对丁胺卡那霉素、氟哌酸、氟嗪酸、环丙沙星、恩诺沙星和氯霉素等药物均敏感或高度敏感，可作为治疗奶牛子宫内膜炎的首选用药。

3 讨论

奶牛子宫内膜炎的病因比较复杂，细菌感染是其中主要的原因。该病多继发于分娩异常及子宫的其他疾病如子宫炎、子宫积脓、产道损伤等。产后处理不当或处理不及时可引起继发感染；胎衣不下或剥离不彻底，滞留部分变性坏死，由病原微生物侵入造成化脓性炎症，引起脓性子宫内膜炎；牛舍不清洁，牛床潮湿，粪尿滞留，母牛外阴部细菌感染带入产道，均可引发细菌感染。引发奶牛子宫内膜炎的主要病原菌有葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌、变形杆菌、化脓性棒状杆菌、支原体等。本文的细菌分离结果也表明，葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌为该病的主要致病菌。这些细菌一般会在配种输精或分娩时到达子宫，有时也可通过血液循环而导致感染。另外，该病的发生也与人为因素、营养因素和遗传因素等有关。药敏试验结果表明，丁胺卡那霉素、氟嗪酸和恩诺沙星等药物对几种试验菌均高度敏感，可作为奶牛场治疗奶牛子宫内膜炎的首选药物。链霉素、林可霉素、四环素等的抑菌效果较差，可能与其长期使用这些药物而产生耐药性有关。因此用药时需合理配伍，不随意加大剂量，以免产生耐药菌株。近年来，应用中草药治疗奶牛子宫内膜炎已有不少成功的报道，采用中西医结合疗法既可保证疗效，又能减少药物残留。要想更好地控制奶牛子宫内膜炎的发生，除了在治疗该病时选择比较敏感的药物外，还应采取以下措施进行综合防制：加强饲养管理，增强奶牛抗病能力；加强奶牛保健措施，认真做好奶牛传染病的防疫检疫和乳房炎的检测工作；做好牛舍、产房及运动场的消毒，保持良好的卫生条件，夏季加强通风，冬季注意保暖；人工受精必须严格遵守操作规程；产后注意观察子宫的复旧状况，对子宫内膜炎必须坚持早发现、早治疗的原则，避免延误有效的治疗时机。?