3、授精
　　
　　打开螫针腔。　蜂王麻醉后，调整显微镜，在镜下移动背腹钩操纵杆，使背腹钩在探针配合下，分别钩住背腹板顶端的中央位置，并向外侧拉动背腹板，使其间距为3毫米～4毫米，然后再移动背钩，使其“膨大”部分嵌入到螫针腔基部的三角缝内，再拉动背腹钩，把背腹板间距拉至5毫米～6毫米。
　　
　　进针注射。　螫针腔打开后，调整蜂王和针头的角度，排除针头尖中的生理液和气泡后，使针尖接近阴道口，用探针压住瓣突，将针尖徐徐推入阴道直至中部输卵管，取出探针，将精液慢慢注入。一次性授精通常注入8微升精液；两次性授精，每次各注4微升～5微升精液，其间隔24小时～48小时。授精完毕，10秒～15秒后退出针头，取出蜂王，点上标记，待其复苏后，送回原核心群或框式王笼暂时贮存。
　　
　　四、人工授精后的管理
　　
　　蜂王人工授精后，需要细心管理，注意以下几个方面：首先，蜂王授精后要及时放回原核心群（或大群），使其能得到工蜂饲喂，不致受饿而影响发育；其次，要保证授精王所在蜂群的蜂数，以便蜜蜂能自行调节巢温；因为，温度是制约精子转移的重要因素；另外，还要预防蜂王出巢进行自然交尾，方法是将蜂王剪翅或幽闭巢门，防止蜂王外出，也可利用大型框式王笼封闭观察其产卵情况。