氯化钙（CaCl2）004g

　　氯化铁（FeCl3）0004g

　　硫酸镁（MgSO4·7H2O）01g

　　酵母膏10g

　　（或酵母粉08g）

　　pH68

　　A3联合固氮菌培养基

　　D-葡萄糖酸钠（C6H11O7Na）50g

　　磷酸二氢钾（KH2PO4）04g

　　磷酸氢二钾（K2HPO4）01g

　　硫酸镁（MgSO4·7H2O）02g

　　酵母膏10g

　　（或酵母粉08g）

　　氯化钠（NaCl）01g

　　氯化钙（CaCl2）002g

　　氯化铁（FeCl3）001g

　　钼酸钠（Na2MoO4）0002g

　　pH68!70

　　A4马丁培养基（测霉菌数）

　　磷酸氢二钾（K2HPO4）10g

　　硫酸镁（MgSO4·7H2O）05g

　　葡萄糖（C6H12O6·H2O）100g

　　蛋白胨50g

　　1%孟加拉红水溶液〔四氯四碘荧光素

　　（C20H4ClI

　　44O5）〕33mL

　　每升培养基中加入01g氯霉素，一起灭菌。

　　注以上各培养基需蒸馏水1000mL，琼脂18!20g

　　附录B

　　（标准的附录）

　　染色剂和染色方法

　　B1荚膜染色法

　　B11染色剂

　　石碳酸复红染色液

　　甲液：碱性复红（Basicfuchsin）

　　（C20H20ClN3）03g

　　95%酒精（CH3CH2OH）100mL

　　乙液：石碳酸（C6H5OH）50g

　　蒸馏水950mL

　　a）将碱性复红在研钵中研磨后，逐渐加入95%酒精，继续研磨使之溶解，配成甲液。

　　b）将石碳酸溶解在蒸馏水中配成乙液。

　　c）把甲液和乙液混合摇匀，成为石碳酸复红，通常可将混合液稀释5!10倍使用。

　　稀释液易变质失效，一次不宜多配。

　　B12染色方法

　　B121取少量培养菌涂于载玻片水滴中，涂成薄层。

　　B122自然干燥或稍加热。

　　B123在石碳酸复红染1min后，水洗，干后镜检。

　　B13染色结果

　　菌体为红色，菌体周围有一层透明圈即为荚膜。

　　B2芽胞染色法

　　B21染色剂

　　B2115%孔雀绿

　　孔雀绿（C23H25ClN2）50g

　　蒸馏水100mL

　　B212005%碱性复红

　　碱性复红（C20H20ClN3）05g

　　95%酒精100mL

　　B22染色方法

　　B221制片。

　　B222加孔雀绿染液3!5滴于涂片处，酒精灯火焰加热至冒汽，但不沸腾，并随时补加

　　染液，维持涂片处不干，染色约5!10min。

　　B223自来水冲洗30s。

　　B224用005%碱性复红染色1min，水洗，镜检（若005%碱性复红浓度太高，可根据

　　具体情况适当稀释）。

　　B23染色结果

　　芽胞绿色，菌体红色。

　　B3革兰氏染色法

　　B31染色剂

　　B311结晶紫染色液

　　甲液结晶紫（C25H30ClN3·9H2O）20g

　　乙醇（95%）

　　（CH3CH2OH）20mL

　　乙液：草酸铵〔（NH4）2C2O4·H2O〕08g

　　蒸馏水80mL

　　甲、乙液相混，静置48h后使用。

　　B312卢哥（Lugol）氏碘液

　　碘（I2）片10g

　　碘化钾（KI）20g

　　蒸馏水300mL

　　先用少量（3!5mL）蒸馏水溶解碘化钾，再投入碘片，待碘全溶后，加水100mL，配成母

　　液，使用时加两倍水，稀释成卢哥氏碘液。

　　B313脱色液：95%乙醇。

　　B314复染液：05%的番红水溶液

　　25%番红酒精溶液10mL

　　蒸馏水100mL

　　B32染色方法

　　B321制片。

　　B322滴加结晶紫液，覆盖1min。

　　B323用水冲净结晶紫液。

　　B324滴加碘液冲去残水，并覆盖1min。

　　B325用水冲去碘液，用吸水纸吸去水分。

　　B326加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，30s后水洗，吸去水分。

　　B327番红染色液染10s后，自来水冲洗。干燥，镜检。

　　B33染色结果

　　革兰氏正反应菌体呈紫色，负反应菌体呈红色。

　　B4鞭毛染色

　　B41染色剂

　　甲液：丹宁酸（C76H52O46）50g

　　氯化铁（FeCl3）15g

　　甲醛（15%）

　　（HCHO）20mL

　　氢氧化钠（NaOH）

　　（1%）10mL

　　蒸馏水100mL

　　乙液：硝酸银（AgNO3）2g

　　蒸馏水100mL

　　待硝酸银溶解后，取出10mL备用，其余的90mL硝酸银液中滴加浓氢氧化铵，则形成很浓厚的沉淀，再继续滴加氢氧化铵到刚刚溶解沉淀成为澄清溶液为止。再将备用的硝酸银慢慢滴人，则出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状的沉淀又消失，再滴入硝酸银，直到摇动后，仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止（如雾重，则银盐沉淀出，不宜使用）。