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一起母猪繁殖障碍疾病的诊断


以流产、木乃伊和死产为主要特征的繁殖障碍给现代养猪业带来巨大的危害。母猪的繁殖障碍主要包括不育、空怀、屡配不孕、返情、死胎、流产、产弱仔和畸形胎等。引起母猪繁殖障碍的因素主要有两类:一类是引起生殖道原发性感染的病原(传染性因素),约占30%~40%;另一类是毒素、环境和营养等非传染性因素,约占60%~70%。但是,往往以传染性因子(尤其是病毒)的影响更加令人关注,其中影响较大的有PRV、猪细小病毒(PPV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、日本乙型脑炎病毒(JEV)和猪瘟病毒(HCV)。这些病毒所致疾病症状相似,都可以通过胎盘感染胎儿,进而影响胎儿的发育和存活。

正是因为临床上引起猪繁殖障碍的病因很多,尽早地确诊病因,对于及时采取措施防止繁殖障碍发生是非常关键的,基于此,本文对引起黄石某猪场母猪繁殖障碍的原因进行了研究,报告如下。

1、流行病学与症状

1999年5月至2001年2月,湖北黄石某猪场母猪持续发生流产、死胎和初生仔猪15日龄左右大批死亡的现象。据了解,该场种猪1997年的4~5月接种过乙脑乳油剂灭活苗。1999年接种过猪细小病毒疫苗、猪瘟疫苗。但成效不明显,据不完全统计,该场在发病期间有50%母猪发生流产、死胎和木乃伊胎,131头母猪所产仔猪出生后短期内大批死亡,母猪产前产后未见明显病状。初产母猪和经产母猪情况类似。

2、病理变化

对淘汰母猪进行剖检,发现脾脏肿大,脾尾部有指面大的出血性梗死;肺小叶上有多处指面大小的瘀血斑;肾脏呈土黄色,内有大量尿酸盐沉积;卵巢上有多个成熟卵泡,子宫角发白,切开后发现其壁增厚,使子宫角腔只余下一点缝隙;脑膜表面有出血点,脑表面血管充血;其他器官基本正常。一共剖检5头母猪,大体剖检病变基本一致。

3、实验室诊断

(1)PCR扩增PrVgD基因:从5头母猪的大脑、卵巢和卵泡液中,用PCR均扩增出猪伪狂犬病病毒的gD基因片段。

(2)猪瘟荧光抗体直接染色法:取发病母猪的肾脏和脾脏,作冰冻切片,用猪瘟荧光抗体进行染色,为阴性。

(3)病毒分离:取发病母猪的大脑、卵巢、卵泡液接种PK-15细胞,接种卵泡液的PK-15细胞24小时后开始出现病变,部分细胞变圆脱落,出现典型的病变,而接种大脑组织和卵巢的细胞无明显病变。

4、讨论

对于母猪繁殖障碍疾病的诊断,目前较为有效方法是病毒分离鉴定、免疫荧光试验、中和抗体试验、酶联免疫吸附试验(ELISA)或多聚酶链反应(PCR)。本文采用PCR扩增、病毒分离、荧光抗体染色等方法进行诊断,据试验结果,再结合流行病学分析,诊断该例母猪繁殖障碍是由PR病毒引起。在试验结果出来后,该猪场用我室研制的PRV灭活疫苗免疫母猪,病情得到控制,进一步表明该病的病因是PRV。

在病毒分离试验所用样品中,大脑组织和卵巢都用甲醛固定了,只有卵泡液是用无菌注射器收聚的,所以受甲醛的影响较小,而该样品接种PK-15细胞后,细胞病变最严重,这说明卵巢中的病毒量最大,也说明病变是由病毒引起的,病毒以外的因素如甲醛的毒害所致细胞病变的可能性小。

在猪瘟荧光抗体直接染色中,未出现典型的猪瘟病毒的阳性信号,荧光显微镜下观察到,被检样品与阴性对照无明显差异,说明被检样品中无猪瘟病毒抗原。

本试验第一次从临床病例的母猪卵巢的卵泡液中扩增到PR病毒基因,提供了病毒对生殖系统特别是仔猪侵害的直接证据。


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