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猪瘟的临床诊断与实验室诊断


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猪瘟(classical swine fever,CSF),又称“烂肠瘟”,是由猪瘟病毒引起的猪的一种热性、致死性、高度接触性传染病,对养猪业影响颇大。1984年,国际兽疫局(OIE)将其列入A类传染病,我国目前将其定为一类传染病。
  根据多年的流行病学研究和文献资料表明,大、中型养猪场通过科学而有效的免疫接种程序所建立的猪群,在猪瘟流行时只引起猪瘟的散发。尽管实行科学的防疫制度,包括疫苗提高药量,但没有完全扑杀带毒猪,某些养猪场就成为猪瘟的疫源地。因此,要不断地学习和研究预防猪瘟科学的措施、方法,主要环节是提高防疫措施、诊断、接种后的免疫预防和评价。对此,养猪场迫切需要及时诊断猪瘟和定期检疫猪瘟,只有快速、灵敏、准确、便捷的临床与实验室诊断,有利于有效地控制和扑灭猪瘟,从而保护养猪业。

  1 临床诊断
  猪体温变化明显,迅速上升到41℃,少数达到42℃,稽留不退。食欲不振,其特征为病猪把嘴放在食物处片刻,又回到休息处。精神萎顿,伏卧嗜睡,后肢无力。先便秘后腹泻,以后交替发生,粪便中混有粘液或血丝。后期部分病猪有尿血、气喘等症状。急性结膜炎流出粘液或脓性分泌物,有些上、下眼睑粘在一起。常在鼻端、耳、四肢内侧、腹下有出血斑和出血点,指压不褪色。个别猪有神经症状:磨牙、痉挛、脚交叉、站立不稳。先天性猪瘟病毒感染可造成流产、木乃伊胎、畸形、死胎、有震颤症状的弱仔猪出生、或外观正常但生产出被感染的仔猪。
  全身性出血,皮肤、粘膜、实质器官都有充血和大小不等的出血点。淋巴结外观充血肿胀,切面周边出血,呈红白相间的“大理石样”。脾脏不肿大,边缘发现楔状梗死区。肾皮质色泽变淡,有点状出血。膀胱粘膜表现不同程度的充血,粘膜上有针尖大小的出血点。扁桃体出现梗死,随着细菌侵入发生化脓性炎症。肠道有不同程度的充血和出血,回盲瓣、回肠、结肠可见轮层状溃疡即“扣状肿”。公猪包皮积尿。
  根据以上临床症状、特征性病理变化,可以建立猪瘟的初步诊断,但应与猪丹毒、猪副伤寒、猪肺疫、猪弓形体和链球菌病等进行鉴别。

  2 实验室诊断
  根据临床症状、特征性病理变化,建立猪瘟的初步诊断,但确诊、非典型猪瘟,特别是仔猪表现的复杂症状,难以做出诊断,必须借助实验室诊断进行确诊,现在实验室诊断应用方法有动物试验、病毒分离、免疫荧光试验等。

  2.1 动物试验
  取病猪的扁桃体、脾脏、肾脏、淋巴结等组织(扁桃体是分离病毒首选器官,如采集不到扁桃体,也可采集脾脏、肾脏、淋巴结),剪碎、研磨,加生理盐水制成乳剂,无菌处理后接种易感猪,观察发病情况,然后分离病毒。中国兽医药品监察所建立用家兔代替易感猪诊断猪瘟试验(兔体免疫交叉试验),将病料乳剂接种健康家兔,7d用兔化猪瘟弱毒注射家兔,24h后每6h测温1次,连续3d。无定型热反应,说明病料中含有猪瘟病毒。
  2.2 病毒分离
  取病猪的扁桃体、脾脏、肾脏、淋巴结组织,加双抗后磨成乳剂,过滤、离心后取上清液,接种PK-15、PK-2a、ST等细胞进行病毒分离。Moormann等用SK-6细胞培养克隆化的猪瘟病毒,获得高效价的猪瘟病毒,并提取猪瘟病毒的RNA,建立猪瘟病毒的cDNA文库,完成Alfort株、Brescia株的全基因序列分析。
  2.3 免疫荧光试验
  用冰冻切片或细胞触压片进行直接或间接荧光抗体染色,也可先将病料乳剂接种于细胞培养后,再用荧光抗体检测感染细胞,能直接检出感染细胞中的病毒抗原。此法方便快速、检出率高,许多国家将它作为执行猪瘟消灭计划的法定诊断试验。
  2.4 血清中和试验
  可以检测出猪体内的抗体,目前最常用方法是免疫荧光中和试验、PAV株中和试验。邵振华等利用免疫荧光中和试验,对70日龄65份、5~6日龄34份、7月龄44份的猪瘟非免疫血清进行猪瘟母源抗体检测,结果70日龄阳性率52.3%,到5~6月龄全部转为阴性。
  2.5 间接血凝试验
  操作简单,易制定,既可检测抗原,也可检测抗体,主要是监测猪瘟免疫抗体水平。李树春等将猪瘟兔化弱毒株细胞培养物浓缩纯化,致敏由戊二醛鞣酸处理的健康绵羊红细胞,制成冻干猪瘟间接血凝诊断液,用以检测血清中的猪瘟抗体效价。


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