a.变形红细胞;b.附着在红细胞上的附红体(略)
图4 病猪血液扫描电镜照片(×5 000)?(略)
a.附着附红体的红细胞;b.游离的附红体(略)
图5 健康猪血液扫描电镜照片(×4 000)红细胞的正常形态(略)
图6 健康猪血液扫描电镜照片(×5 000)红细胞的正常形态(略)
3 本动物接种?
将4 ml疑似猪附红体病病猪血液经前腔静脉注入1月龄健康仔猪。接种后1~13日逐日观察猪的精神、食欲、粪便等临床症状,每天上午10点和下午5点定时进行体温测定。健康仔猪在接种病猪血液之前,体温为39.5℃,皮肤红润,精神好,食欲正常。血液压片镜检可见红细胞正常,均为圆形,血液中也观察不到附红体。接种后第2天,接种猪即开始表现出精神不振、少食、嗜睡等症状;第3天,实验猪体温升高到40.3℃,血液压片镜检发现部分红细胞变形为齿轮形、星芒状或不规则形,并可见到血浆中游离的附红体。接种猪可视黏膜苍白,皮肤苍白。1周后体温升高到最高41.75℃,用手触膜胸腹部,有发烫的感觉,仔猪便秘。体温变化曲线见图7。?
图7 人工接种猪体温变化曲线图(●:10am体温;▲5pm体温(略)
4 治疗
治疗前,测得实验猪的体温为40.75℃,血液压片镜检可见血液中有附红体,红细胞变形。使用脱氧土霉素对实验猪治疗,剂量为10 mg/kg体重,肌肉注射,连续用药3天。第2天,仔猪体温降为39.8℃,第3天体温降为39.6℃,血液压片镜检可见变形红细胞已大大减少,仅见少量附红体存在。3天后再用药1次。1周后,仔猪体温为39.5℃,精神好,食欲佳,血液压片镜检,红细胞形态正常,且无附红体存在。?
根据血液压片镜检、扫描电镜镜检、本动物接种实验以及药物治疗,将此次送检病例诊断为猪附红体病。?
5 讨论?
5.1 猪附红体病的诊断 根据本病的流行病学、临床症状、剖检病变等可对本病作出初步诊断,确诊必须结合实验室检验。通常在虫血症期间,作血液的压片观察或者电镜观察,可以直接观察到红细胞病变和附红体而得以确诊。有研究认为,ELISA证明本病的阳性抗原与猪的其他疾病无血清交叉反应,表明ELISA是一种敏感、快速、特异的诊断方法,但不适用于急性期的诊断。此外,分子生物学诊断技术也被用于本病的诊断。在虫血症期间,因感染猪血液中含有大量附红体,可从血液中抽提DNA制成探针,通过DNA分子杂交区别感染猪和非感染猪。总的来说,血液学观察,是诊断本病最直观和相对简便的方法,适合在生产上的诊断。此外,猪附红体病易并发其他多种疾病,如链球菌病、猪瘟、弓形体病等,在诊断时应注意和其他疾病相区别。?
5.2 关于血液压片镜检 本研究制作血液压片过程中,发现抗凝剂及生理盐水对细胞形态有一定影响,从而容易造成假阳性的判读。在采血时,采用阿氏液和3.5%柠檬酸钠做抗凝剂,在用生理盐水稀释血液做压片观察,可引起正常红细胞不同程度的变形,有的红细胞出现带刺的边缘,整个细胞似星芒状,容易错判为因附红体导致的红细胞变形。对于本身就感染附红体的红细胞,可进一步加重红细胞的变形,张家峥等(2002)也有类似报道。他认为,带刺红细胞应称为锯齿形红细胞或刺毛红细胞,在血液离体后,数量随时间延长而增加。锯齿红细胞显示血液pH值失衡,血液克分子浓度发生变化,钙磷比例失调等。因此,采用这类抗凝血压片镜检作为附红体的诊断性检测,有很大的局限性。?
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