1）输卵管冲胚法 供体羊发情后2～3天，就可采用输卵管冲胚法。将冲胚管一端由输卵管伞部喇叭口插入约2～3㎝深处（打活结或用钝圆的夹子固定），另一侧接集卵皿。用注射器吸取37℃的冲卵液5～19ml，在子宫角靠近输卵管的部位，将针头朝输卵管方向扎入，一只手的手指在针头后方捏紧子宫角，另一只手推注射器，冲卵液由宫管结合部流入输卵管，经输卵管流入集卵皿。此法胚胎回收率高，冲卵液用量少，检卵省时间。但容易造成输卵管及伞部粘连。

2）子宫冲法 供体发情后6～7.5天，采用子宫法采卵。将子宫暴露于创口表面后，用套有胶管的肠钳夹在子宫角分叉处，注射器吸入冲卵液20～30ml（一侧用50～60ml），冲卵针头（钝形）从子宫角尖端插入，当确认针头在官腔内，进退通畅时，将硅胶管连接于注射器上，推注冲卵液。当子宫角膨胀时，将回收卵针头从肠钳基部的上方迅速扎入，冲卵液经硅胶管收集于集卵皿内，最后用两手指拇指和食指将子宫捋一遍。另一侧子宫角用同样的方法冲胚。进针时避免损伤血管，推注冲卵液时力度和速度不宜太快。子宫法对输卵管损伤很小，但回收率较输卵管法低，用液较多，检卵时用的时间较多。

3）冲卵管法 将子宫取出后，在子宫体上扎孔，将冲卵管插入，使气球在子宫角分叉处，使冲卵管尖端靠近子宫角前端，用注射器注入8～10ml气体，然后进行灌流，分次冲洗子宫角，每次灌注10～20ml，一侧用液50～60ml，冲完后，气球放气，用同样方法冲洗另一侧。

3 胚胎保存

3.1 胚胎常规保存

采集到的胚胎，如果不能立即移植给受体羊，可经短期或长期保存。生产上进行鲜胚移植时，一般上午采集的胚胎，下午移植，或将胚胎净化后，在胚胎保存液（国产或进口）中室温条件下短期培养4～5天对胚胎的存活影响不大。据报导，将绵羊胚胎在0～13℃、保存10天仍然能移植成功（谭丽玲，1978），在冰箱中4～6℃的条件下保存4天，胚胎存活率也很理想（丁红，1995）。

3.2 胚胎的冷冻保存

“冷”处理对“细胞”生命活动影响的报导最早始于1776年的Spallanzani对精子的冷冻保存试验。1972年，Whittinghan用快速冷冻法成功地保存了小鼠胚胎，随后用慢速冷冻法冷冻牛胚胎也获得成功。Rall和Fehy于1985年发明了玻璃化冷冻胚胎法。目前应用胚胎冷冻技术已经能够长期保存绵羊胚胎，并向着实用易行的方向发展。

冷冻剂的种类是影响胚胎冷冻解冻后存活率的重要因素之一。冷冻剂的种类很多，低分子量可渗透性保护剂，如甘油、乙二醇、丙二醇、二甲基亚砜、乙烯醇、乙烯胺及甲醇等；低分子不可渗物质如，海藻糖、半乳糖、葡萄糖、蔗糖等；大分子保护剂如，聚乙烯吡咯烷酮、左旋糖苷、白蛋白等。在最初的研究中一般使用一种保护剂，随着研究的深入，发现混合保护剂能有效提高胚胎冷冻存活率及移植受胎率。低温保护剂的基础液大多用PBS缓冲液配制，根据不同试验需求加丙酮酸、钠、血清、白蛋白等（L.J.Maclellan,et al 2001），有的直接采用H－SOF培养液（N.Oberstein,et al.2001）。常用的绵羊胚胎冷冻方法有：

1）慢速冷冻法 这是一种较传统的哺乳动物胚胎冷冻法，使用渗透较慢的低温保护剂。可分为慢速冷冻、慢速解冻和慢速冷冻、快速解冻法。前种方法脱水完全，细胞内形成冰晶较少，但耗时间长，且解冻时细胞内易出现重结晶现象，损伤细胞。后者可防止解冻时细胞内发生重结晶，但由于温度恢复过快，细胞内外渗透压急剧变化，易引起胚胎细胞破裂死亡（Whitting ham DG,1972;Fridler S et al,1988;rayos AA et al,1992）。

2）快速冷冻法 这是将胚胎部分脱水后，以高于1250℃/min的速度快速冷冻胚胎的方法。胚胎在高浓度的低温保护剂中平衡，但细胞内外水分都要结晶，另外短暂的平衡过程，细胞脱水并不完全，易在细胞内形成冰晶，导致胚胎发生物理损伤（严云谨，1995）。

3）一步细管法 将冷冻液（1.5M甘油）和稀释液（0.5～1.0M蔗糖）装在同一细管中，中间用气泡隔开，解冻后，摇动细管使冷冻液和稀释液混合，胚胎处于蔗糖溶液中，因为蔗糖是不可渗的，所以甘油和水渗出细胞。胚胎收缩，胚胎移入受体子宫后子宫液中的水分渗入细胞，又使胚胎恢复原来的体积。

4）玻璃化冷冻 在急速降温的过程中，抗冻液变得粘稠，形成无晶的玻璃化状态Rall和Fahy（1985）最初用20.5％DMSO－15.5％乙酸胺－10％丙二醇－6％聚乙二醇作为玻璃化冷冻液冷冻小鼠胚胎，获得了87.7％的冷冻存活率。但用DMSO\乙酰胺\丙二醇\聚乙二醇等作为抗冻剂，溶液的毒性较大，胚胎需在低温下多步平衡后，才能投入液氮中保存，且结果不稳定。近年来对玻璃化胚胎冷冻研究趋向于向冷冻保护剂添加各种物质，如糖类、抗冻蛋白、透明质酸、松驰素、盐等以提高冷冻效果（L.J.Maclellan,et al 2001）。