植物的组织培养作为一种新兴技术和科研手段,在植物科学的各个领域蓬勃发展,并且在农业、林业、园艺、中草药等生产领域得到广泛的应用,显示出巨大的优越性。短期内提供大量的苗木,以满足生产上的需要。组织培养作为一个无性繁殖的手段,用1个苹果芽在8个月内可繁殖6万个枝条,用1个杨树腋芽1年内可繁殖100万株苗木,用1个五味子芽1年内可繁殖50万株苗木,由此可见其应用前景十分广阔。
(1)外植体的取得和处理取五味子品种或优系的腋芽作为组织培养的材料。剪取2厘米长的带腋芽的嫩茎段,用水冲洗10分钟,用2%的次氯酸钠灭菌20分钟,用无菌水冲洗5次,再用无菌纱布吸干水分,通过无菌操作接种于诱导腋芽萌发的培养基上。
(2)芽的诱导诱导培养基采用MS+6一BA4毫克/升+IBA0.2毫克/升+LH1000毫克/升;MS的维生素加倍,蔗糖30克/升,琼脂9克/升,pH为5.8,保持温度18~20℃,光照10小时,光照强度800~1200勒克斯,经4~5周可以长出芽。
(3)继代培养将长到2厘米的芽从枝上切下,接种到继代培养基上培养,培养基为MS+6一BA4毫克/升+1.BAO.2毫克/升+LH1000毫克/升;MS的维生素加倍,蔗糖30克/升,琼脂9克/升,pH为5.8,培养条件为温度18~20℃,光照10小时,光照强度800~1200勒克斯,经4周可以长出芽丛,将芽切下继续扩大繁殖,直到达到所需数量。
(4)生根培养将大于2厘米的芽丛枝转接于生根培养基上,生根培养基为:NH4N()s825毫克/升,KN()3950毫克/升,MgSO4?7H2()195毫克/升,KH2PO41()(]毫克/升,F}EDTA35毫克/升,K10.83毫克/升,HsBO36.2毫克/升,MnS()。4H2O0.25毫克/升,CuSO4?5H2O0.025毫克/升,CoCl2。6H2O0.025毫克/升,肌醇200毫克/升,烟酸1.O毫克/升,吡哆醇1.0毫克/升,硫胺素o.2毫克/升,水解清蛋白l00()毫克/升,吲哚丁酸2毫克/升,蔗糖15克/升,琼脂9克/升。环境条件:温度20~25℃,光照14小时,光强度2000勒克斯,经4~6周可生根。
(5)练苗将长出数条1厘米以上根并有须根苗洗净根部培养基,栽植于直径8厘米的营养钵中,营养钵中的栽培介质用经过消毒的腐殖质土。保持相对湿度85%,温度20~25℃,光照2000~2800勒克斯,1周后可逐渐减少相对湿度至自然条件,4~5周后当苗长出新叶及新根可进行移栽,成活率在90%以上。
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