3.2.3微量血清中和试验林志雄等建立了PED微量中和试验,采用适应于传代细胞生长的PEDVG1株,以PK15作指示细胞,48h判定。研究证实本方法检验准确、可靠,具有较高的敏感性,可用于流行病学调查。
3.2.4ELISA法ELISA法最大的优点是可从粪便中直接检查PEDV抗原,目前应用也较为广泛。陈茹等用分离纯化的PEDV抗原,建立斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测猪流行性腹泻(PED)抗体。采用此方法分别对来自加拿大、台湾省进口的种猪和海南省、广东省种猪群的血清样共834份进行了检测,检测的抗体阳性率达21。用琼扩试验与Dot-ELISA比较,阴性血清样品检测符合率为100,而阳性血清样品检测符合率为31.8,说明后者更敏感,且该试验重复性较好。于强等用PEDV吉株猪胎肠单层细胞培养物,以冻融法制备抗原,建立了间接ELISA法检测PED抗体的方法。KimO等建立了单克隆抗体基础上的免疫组化法,该方法可在福尔马林固定、石蜡包埋的肠组织中准确而特异的检出PEDV,可用于鉴别诊断TGEV与PEDV。
3.2.5RT-PCR法Ishikawa等根据S基因序列设计了一对可扩增目的片段854bp的引物,成功的建立了诊断PEDV的RT-PCR法,可进行细胞毒和粪便毒的检测,灵敏度可达100TCID50mL,并可在8h内测出。Kubota等[12]根据N基因序列设计了一对可扩增目的片段540bp的引物,成功地建立了诊断PEDV的RT-PCR法,可进行细胞毒和粪便毒的检测。在韩国KimO等已建立了TGEV和PEDV的二联RT-PCR诊断方法,可同时检测出10TCID50mL的TGEV和PEDV。KimO等对免疫组化、原位杂交、RT-PCR3种方法进行了比较,认为RT-PCR法检测结果的重复性最好。此外,KimO等]还建立了鉴别TGEV和PEDV的多重巢式RT-PCR法。国内乔宪凤等以PEDV的膜蛋白(M)的RNA为模板,根据Durate等人发表的基因序列,设计3条位于PEDV膜蛋白(M)基因上的引物,进行RT-PCR反应,确立了RT-PCR最适反应条件。
4鉴别诊断
猪传染性胃肠炎及流行性腹泻皆属于病毒性腹泻病,诊断时要注重与一般条件因素引起的腹泻,饲料因素引起的腹泻,以腹泻为主要症状的传染病,伴有腹泻症状但以其他临床症状为主的疾病进行鉴别诊断。
5防治
哈尔滨兽医研究所的科研人员研制出猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻氢氧化铝灭活二联苗,此苗在母猪产前20-30d接种4ml,仔猪断奶后10-15d接种一次,免疫效果比较好。此外,刘万钧等在实验室证实了猪白细胞干扰素在Vero细胞培养中和乳猪空肠结扎肠段中对PEDV有明显的干扰作用,还用干扰素对断奶仔猪进行PED防治试验取得了良好结果。对猪病毒性腹泻症无特效治疗方法,但为了防止继发感染和脱水造成衰竭,降低死亡率和促进康复,可以采取一些对症疗法。
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