猪链球菌病（Swine Streptococcosis）是危害养猪业的一种常见传染病。在我国，对猪危害最严重的以C群兽疫链球菌为主，其次是D群，L群、S群和R群也可引起，E群主要引起关节炎和淋巴结脓肿。猪链球菌病在临床上可分为败血症型、脑膜炎型、关节炎型、淋巴结脓肿型等。哺乳仔猪和刚断乳仔猪发病主要以败血症型、脑膜炎型为主，发病率和死亡率均较高。肥育猪发病多以关节炎或淋巴结脓肿为特征，其死亡率较低，但影响生长发育。

    2005年12月，郑州南郊某猪场仔猪流行关节炎及败血症，多为2～6周龄仔猪;病猪精神不振，食欲减少或废绝，体温40.0℃～41.5℃，呈稽留热，眼结膜潮红，眼睑稍水肿;多数病猪呼吸迫促;部分仔猪有关节炎症状，关节肿胀、疼痛、后肢不能站立;个别猪突然发病，出现神经症状;病死猪腹侧皮肤及皮下瘀血，血液呈暗红色，凝固不良，肺呈红色，体积增大，切面有大量的红色泡沫，脾、肝局部瘀血、肿胀，呈暗红色，肠系膜淋巴结肿大，胃底部出血，四肢关节腔滑液多且浑浊。

    根据临床及剖检，初步诊断为猪链球菌病，并无菌采取关节炎病猪的关节液及败血症病猪的肝、脾、肺及肠系膜淋巴结，经实验室分离鉴定，证实为猪链球菌。现将分离鉴定结果报告如下。

    1 试验材料

    1.1 病料 无菌采患关节炎病猪的关节液，无菌采集急性死亡的病猪心血、肝、肺、脾及肠系膜淋巴结等病料。

    1.2 试剂 染色液、常规试剂自行配制。

    1.3 培养基 生化实验用培养基、营养肉汤培养基、普通营养琼脂培养基和血清肉汤培养基按常规方法配制，鲜血琼脂平板由郑州牧专实验设备管理科提供。

    1.4 药敏纸片 由郑州牧专实验设备管理科提供。

    1.5 试验动物 健康小白鼠10只，由郑州牧专动物医药系实验动物中心提供，观察一周，健康者做动物致病性实验用。

    2 方法

    2.1 涂片镜检 无菌采集急性死亡的病猪心血、肝、肺、脾及肠系膜淋巴结等病料，制作肝脏、脾脏的触片，用关节液、心血涂片，干燥、火焰固定后进行革兰氏染色镜检。

    2.2 细菌分离培养 无菌采集的肝、肺、脾及肠系膜淋巴结、关节液等病料分别划线接种鲜血琼脂平板，37℃培养24～48小时后，观察菌落特征，选取鲜血琼脂平板上微小、圆形、边缘整齐、略带灰白色、露滴样、有明显的β型溶血环的单个菌落的小部分革兰氏染色、显微镜检查呈成对或短链状革兰氏阳性球菌后，菌落的其余部分再分别接种于普通琼脂斜面培养基、血清肉汤培养基、营养肉汤培养基，置37℃温箱内培养24～48小时，如此获得分离菌的纯培养物及在不同培养基上的生长情况。

    2.3 培养特性检查 观察其在不同培养基上的生长情况，并涂片、染色、镜检。将纯培养物接种于鲜血琼脂斜面培养基，分别置于37℃、10℃和45℃条件下培养24～48小时，观察其能否生长。

    2.4 生化试验特性检查 分离菌血清肉汤培养物分别接种于各种生化培养基，37℃培养24～48小时后，观察其生化反应特性。

    2.5 药敏试验 采用纸片扩散法，根据药敏试验要求的距离，用无菌棉签蘸取分离菌的肉汤培养物，涂布法接种于琼脂平板;待稍干后，用无菌镊子将各种药敏纸片分别平贴在培养基表面，37℃培养20～24小时，观察结果，分别测定抑菌环的直径。判定标准：抑菌环直径在15mm以上为高度敏感，10～15mm为中度敏感，10mm以下为低度敏感，无抑菌环为不敏感。

    2.6 动物试验 健康小白鼠10只，随机分为2组，每组5只，其中一组无菌吸取上述肉汤培养物0.5ml/只分别腹腔注射作为实验组;另外一组5只小白鼠接种无菌生理盐水做对照。每天观察其死亡和发病情况。

    3 结果

    3.1 涂片镜检 革兰氏染色、显微镜检查为革兰氏阳性球菌，呈成对或短链状排列。

    3.2 培养特性 37℃培养24小时后，在鲜血琼脂平板上形成半透明、表面光滑、微隆起的灰白色露珠状的小菌落，外层有明显的p溶血环，生长良好;在普通琼脂平板上菌落贫瘠，比血琼脂平板小;在血清肉汤中先均匀浑浊，后在试管底部形成沉淀，上部澄清，不形成菌膜。染色镜检：革兰氏阳性球菌，固体培养基中的呈3～5个连成链排列，液体培养基中的则呈4～8个连成链排列，或者更长。鲜血琼脂斜面培养基10℃和45℃条件下培养24～48小时，均无生长，37℃生长良好。