B43染色结果
菌体为深褐色,鞭毛为褐色。
附录C
(标准的附录)
菌种固氮效能测定方法
在500mL三角瓶中加入100mL无氮培养基(含糖1%即1g),121灭菌30min。无菌操作,每瓶接入两环待测菌种(或1mL培养3d的培养液),放置摇床上振荡(120r/min)
30培养5!7d后,取出定糖测氮。
定糖采用蒽酮光电比色法。
测氮采用半微量光电比色法。
C1蒽酮光电比色法
C11测定原理
糖类遇硫酸即脱水成为醛类,再变成呋喃衍生物,后者与蒽酮缩合,生成蓝绿色化合物。于580!650nm处进行比色测定(蒽酮可与单糖、双糖、淀粉、糊精等反应),该方法适
合于含糖量0003%以上的样品。
C12试剂和仪器
分析中除有说明外,限用分析纯试剂和GB/T6682中规定的三级水。
C121硫酸。
C12202%(m/V)蒽酮溶液:称取02g蒽酮于100mL硫酸中。充分搅拌,使其溶解。
该溶液不稳定,应当天配用。
C123葡萄糖标准液:准确称取葡萄糖1000g,溶于水中,定容至1000mL,即为
1000mg/mL标准液。
C124分光光度计。
C13分析步骤
C131试样处理
取发酵培养的菌液100!400mL(取决于含糖量),稀释至10000ml,取此稀释液100mL于比色管中,加水至200mL,每管加入蒽酮试剂400mL,摇匀,水浴加热15min,使之充分显色,冷却后,于580!650nm处进行比色测定,记录吸光度,同时进行空白试验。
C132标准曲线绘制
吸取葡萄糖标准溶液100、200、400、600、800、1000、2000mL。于100mL容量瓶
中,加水至刻度,该液分别含糖10、20、40、60、80、100、200%g/mL。
吸取1.00mL放入比色管中,加水至2.00mL,按C1.3.1方法测定,记录吸光度用标准系列的含糖量定义横坐标,吸光度为纵坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
C14分析结果的计算
100mL溶液的含糖量(X)按式(C1)计算:
X=(m1-m2)100
m10010-6…………………………(1)
式中:m1———标准曲线上查出的试验含糖量,%g/mL;
m2———标准曲线上查出的空白试验的含糖量,%g/mL;
m———吸取发酵溶液体积,mL。
C15允许差
a)取平行测定的算术平均值为测定结果;
b)平行测定结果的允许差不大于0005g/100mL。
C2固氮菌液全氮比色测定法
C21测定原理
在硫酸铜或硫酸钾存在下,浓硫酸中加入菌液,并加热使试样全部有机氮转化为氨态氮,与奈氏试剂反应,于波长420nm处进行比色测定。
C22试剂和仪器
分析中除非另有说明,限用分析纯试剂和GB/T6682中规定的三级水。
C221硫酸(GB/T625)。
C222双氧水
C223氢氧化钠(GB/T629)2mol/L溶液:称量8g氢氧化钠溶于水中,定容至100mL。
C22440%(m/V)氢氧化钠(GB/T629)溶液:称取40g氢氧化钠溶于100mL。水中。
C22550%(m/V)酒石酸钾钠溶液:50g酒石酸钾钠溶于100mL水中。
C226奈氏试剂:71g碘化钾,10g碘化汞(HgI2)溶于少量水中,另配16g氢氧化钠溶于
70mL水中,冷却后将前一溶液缓缓倒入氢氧化钠溶液中,边加边搅拌,最后用水稀释至100mL,静置过夜,取清液储于棕色瓶中。
C227催化剂:1000g硫酸钾与100g硫酸铜共同研磨均匀,储于广口瓶中。
C228分光光度计。
C23分析步骤
C231试样制备和测试
吸取固氮菌液100mL于30mL消化管中,加硫酸(C221)3mL,加01g催化剂(C227)和5滴双氧水(C222)消煮至清亮,若反应液久煮不清,可冷却后加1!2滴双氧水(C222),继续煮至无色透明,取下冷却。加少许蒸馏水,摇匀,滴加40%氢氧化钠至出现氢氧化铜沉淀(约11!12mL),加酒石酸钾钠(C225)20滴,以去除氢氧化物沉淀掩蔽钙镁,将试管液全部转移至100mL容量瓶中,消化管洗涤液一并倒入容量瓶,稀释至刻度,摇匀。过滤,滤液1000mL于比色管中,加氢氧化钠(C223)100mL,加酒石酸钾钠100mL,加奈氏试剂3mL,摇匀,显色2!3min后,即倒入比色杯中,于420nm处比色计测定。读取吸光度。
C232标准曲线的绘制
准确称取在(1055)烘1h直至恒重的优级纯试剂硫酸铵04716g,溶于水,稀释至
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