奥利亚罗非鱼(Oreochromis aureus),系鲈形目、丽鱼科、罗非鱼属,是原产于非洲的一种热带中小型鱼类,它与尼罗罗非鱼杂交的后代奥尼罗非鱼(奥利亚罗非鱼♂×尼罗罗非鱼♀),具有高雄性率和明显的的生长优势,比双亲生长快20%~30%,因此多用于做生产奥尼罗非鱼的亲本。奥利亚罗非鱼繁殖条件要求低,具有性成熟早、产卵周期短等特点,只要温度适宜,就能在小面积静水水体中一年多次繁殖,在生产上比较容易得到大量的苗种,因此,很少有人对其进行人工繁殖研究。随着我国罗非鱼的养殖不断发展,对罗非鱼的相关研究也不断开展,尤其在罗非鱼的育种方面,如进行雌核发育,科间杂交等,这就需要通过人工繁殖来获得实验材料。由于罗非鱼是一年多次产卵型鱼类,它的性腺发育是非同步性的,进行罗非鱼人工繁殖比较困难,很难获得成熟卵,从而影响罗非鱼相关研究工作的进一步深入。经过几年的摸索,初步掌握了奥利亚罗非鱼人工繁殖技术,2005年进行了6批奥利亚罗非鱼人工繁殖,现将人工繁殖试验情况总结如下。
1 材料与方法
1.1 亲鱼来源与培育
亲本为淡水渔业研究中心保存的纯种奥利亚罗非鱼,年龄1~3龄,体重150~750g。选择体形完整、体质健壮的做亲鱼,每亩按雌雄比3∶1放养600~800尾。亲鱼放养前每亩施经发酵的粪肥250~500kg培养天然饵料;亲鱼下塘后,投喂饼粕、麸皮、配合饲料等人工饵料,日投饵量为鱼体重的5%左右。另外,定期补充青菜叶、浮萍等青饲料。投饲按"四定"原则,池水保持"肥、活、嫩、爽"。
1.2 产卵池和孵化设施
产卵池为1.2m×0.8m×1.0m的玻璃水簇箱,池水用曝气3d以上的自来水。鱼卵在玻璃培养缸和直径15cm的培养皿中孵化。
1.3 雌、雄鱼及成熟度的判别
雌鱼腹部有三个孔,即肛门、生殖孔和泌尿孔,泌尿孔在生殖突起的顶端,生殖孔开在肛门和泌尿孔之间,为"一"字形的狭长开口,与生殖突垂直。雄鱼只有两个开孔,即肛门和尿殖孔。在繁殖季节,雄鱼体色鲜艳,呈深紫色或紫褐色,背鳍、胸鳍、尾鳍边缘呈艳丽的桔红色,雌鱼体色则呈灰黄色。性成熟的雌鱼在生殖季节性腺轮廓也不明显,性腺成熟好的雌鱼,顺着卵巢方向稍用力挤压,能挤出卵,且卵粒游离,饱满有弹性。如果鱼口中有卵,则是刚产过卵不久,不能用于催产;如果不能挤出卵或挤出的卵大小不均,且粘连在一起,则成熟度不够,不适合催产;如挤出的卵粒无光泽,塌扁,用手轻碰就破裂,则过熟不适合催产。性成熟的雄鱼轻挤腹部,会有透明、稍粘稠的液体从尿殖孔射出。
1.4 催产与人工授精
采用一次注射法,胸鳍基部注射,剂量为雌鱼4mgDOM+6μgLRH~A/kg,雄鱼减半,每尾鱼的注射量控制在1mL内。催产后的亲鱼按雌雄比1∶1放入水簇箱,每个水簇箱放5~7对亲鱼,增氧泵24h增氧。鱼发情时,将雌、雄亲鱼捞起,用毛巾擦干,将雌鱼卵和雄鱼精液挤入小瓷盆中,用羽毛搅动1min,再加入适量的生理盐水,静止放置2~3min后,倒去生理盐水,然后将受精卵进行孵化。
1.5 受精卵孵化与胚胎发育观察
将受精卵转移到培养皿或培养缸中静水孵化,每个培养皿放卵50~100粒,培养缸放卵200~300粒。每2h用吸管吹动鱼卵1次,发现破卵、死卵立即吸除,定时换水,保持水质清新。胚胎发育观察的材料为人工授精的受精卵,在实验室内孵化并进行连续观察记录。观察期间孵化水温是26~28℃。
1.6 鱼苗培育
鱼苗出膜3d后,腹腔背部出现鳔点,肠管与肛门相通,开始投喂鸡蛋黄、轮虫等或小型枝角类和桡足类,一周后投喂粉状配合饲料。鱼苗开口后7~10d在培养缸中培养,之后放入水簇箱培养,长到2~3cm时放入池塘养殖。
2 结果
2.1 亲鱼选择、催产情况
从5月30日到8月13日,每隔15d左右做一次人工繁殖试验,共做了6次,每次从400尾雌鱼中能挑选出6~10尾成熟度好的亲鱼。6次共催产雌鱼40尾,25尾产卵,催产率为62.5%。
2.2 效应时间和产卵行为
水温26~28℃时,效应时间为28~36h。产卵前,个体之间因占地盘不停地打斗,雄鱼一般势强,占据水簇箱的下层和水簇箱边角处,雌鱼一般势弱,多被赶到水簇箱上层。快要产卵时,雌鱼生殖孔会突出3~5mm,通常会下沉到水簇箱底部,占据一处,并有做窝行为:不时地将占据处的杂质、脏物衔开。在雌鱼做窝期间,常有雄鱼与之嬉咬、追逐、打转,直到雌鱼产卵,雄鱼排精。卵分数次产出,每次间隔2~3min,产出的卵粒随即吸入口中,鱼卵在雌鱼口腔内孵化。150g的雌鱼产卵1200粒左右。
2.3 受精卵孵化和胚胎发育
奥利亚罗非鱼卵为沉性卵、无黏性,形如鸭梨,充满卵黄,尖的一端为动物极。卵的其长径为2.06~2.40mm,宽径为1.53~1.80mm,卵径大小随亲鱼大小而有差异。受精卵吸水后膨胀,饱满且富有弹性,卵膜透明,在解剖镜下可清楚看到胚胎发育情况。受精卵30min左右形成胚盘,开始细胞分裂,胚胎发育经过胚盘形成期、卵裂期(2细胞期,4细胞期,8细胞期,16细胞期,多细胞期),囊胚期(高囊胚期,平囊胚期)、原肠期(原肠初期,原肠中期,原肠末期)、神经胚期(神经胚期,胚孔封闭期)、器官形成期(视泡形成期,听泡形成期,心脏形成期)、血液循环期、和出膜期。水温26~28℃时,受精卵孵化时间为78~90h,整个胚胎发育期积温约需要2100℃.h。
2.4 鱼苗培育效果
人工条件下奥利亚罗非鱼鱼苗很容易培养,除畸形鱼苗在出膜2~3d后死亡外,正常苗基本都能存活。
3 讨论与分析
由于奥利亚罗非鱼性腺发育不同步,很难选出成熟度合适的雌鱼。在繁殖季节,性成熟的雌鱼性腺要冬成熟度不够,要么刚刚产过卵,成熟度正好的很少,一般选中率只有1.5%~2.5%左右。因此,人工繁殖最好在奥利亚罗非鱼出越冬池后第一次产卵(15d左右)时开始。因为在奥利亚罗非鱼出越冬池后到第一次产卵期间,其性腺发育比较一至,选出成熟度好的亲鱼机率高些。另外,在繁殖旺盛期(6月初到7月底),也能选出较多的亲鱼。选出的亲鱼必须尽快催产,否则就会过熟或自产。
使用脑垂体(PC)、绒毛膜促性腺激素(HCG)、地欧酮(DOM)、鱼用促排卵素(LRH-A2)做不同的组合催产奥利亚罗非鱼,结果发现使用DOM和LRH-A2组合催产效果较好,但催产率也只有60%左右,因此,催产剂的组合和剂量还有待优化。奥利亚罗非鱼人工催产效应时间很难把握,选出的雌亲鱼催产效应时间差别较大,这可能是因为其一年多次产卵,性腺发育不一至造成的。亲鱼成熟度好则效应时间短,成熟度差则效应时间长;个体小则效应时间短,个体大则效应时间长,不同的个体,效应时间相差8~10h。一般100g~150g雌鱼催产效果较好。另外,奥利亚罗非鱼发情时的行为也不是特别明显,在人工环境下很难把它们抢占地盘的打斗和发情时的嬉咬分开,只有发现雌鱼开始产卵才能认为是效应时间到了。试验曾用水泥池做产卵池,结果很难发现奥利亚罗非鱼什么时候开始发情产卵,用玻璃水簇箱做产卵池也是为了便于观察它们的活动、产卵情况。雌鱼在快要产卵时有两个前兆,一是生殖孔会突出3~5mm,二是有做窝行为。当发现这两个特征时,说明效应时间快到了,随时都有可能产卵,这时要特别注意。
奥利亚罗非鱼卵孵化时间较长,水温在26~28℃时,鱼卵从受精到出膜要78h以上。在孵化期间,鱼卵很容易长水霉死亡。在少量鱼卵孵化时,用曝气的冷开可避免鱼卵长水霉。由于奥利亚罗非鱼卵的卵黄很多,几乎充满整个鱼卵,鱼卵长时间孵化容易破裂,造成卵黄外漏。尤其是在孵化到原肠期后,畸形卵和未受精卵都会破裂,正常的受精卵这时也容易破裂。当孵化水温32℃以上时,即使发育良好的卵也会在孵化前因卵膜破裂卵黄外漏而全部死亡。鱼卵破裂后漏出的卵黄还会使水质迅速恶化,从而引起其它正常鱼卵缺氧死亡。在培养皿、玻璃缸中静水孵化时,要及时把破裂的鱼卵及漏出卵黄吸除,并要经常换水。
|