操作步骤一般由三个人一组，两人轮流抓鸡翻肛，一人来回输精。翻肛人员用左手捉住鸡的双腿，右手大拇指与其他四指分开成八字形，伸贴在肛门上下方向偏肛门的左侧，使掌心堵住直肠开口，分开的手指使劲向外开张肛门，拇指挤压腹部，使母鸡产生腹压，肛门会自然外翻，露出阴道开口。注意翻肛时，无须用力挤压腹部，以防粪尿射出。如果轻压时发现有排粪现象，重复几次翻肛动作，使粪便排出，然后再输精。
输精数量若用新鲜的未经稀释的精液，一般每只每次输0.025～0.03毫升；若用稀释后的精液，一般每只每次输0.05毫升即可。输精深度一般宜采用浅部输精，即阴道部输精，将输卵管插入阴道2～2.5厘米即可。输精时间输精时间在下午3点钟以后开始，到7～8点钟以前结束为最佳。