应用生物技术保护我国地方优良猪遗传资源

　　我国地方优良猪遗传资源数量在继续下降，甚至在加剧。一是资源数量减少，据《中国畜禽遗传资源状况》(2004年)统计，全国有40％以上的地方猪品种群体数量有不同程度的下降，相继有14个地方猪品种被确定为濒危资源，有5个品种为濒临灭绝资源，深县猪、项城猪、豪杆嘴型内江猪、大普吉猪等4个品种(类群)已灭绝。二是品种内遗传多样性丰富度降低，许多地方品种(类群)的母猪数量急剧下降，公猪头数与血统数锐减，品种内的遗传多样性日益缩小，遗传变异日益枯竭，遗传基础愈来愈狭窄。

　　猪冷冻精液是遗传资源保护及育种的一种有效的手段，然而养猪业中限制冷冻精液应用的因素很多,一致公认的主要原因是冷冻精液的受精率比新鲜精液低，不同公猪精液冷冻效果的差异大，每一输精量需要大量精子以及生产成本高。其他较次要的因素是缺乏可靠的评定精液品质的实验室方法，难以掌握适时输精，精液冷冻和解冻的方法复杂，以及猪场不易得到液氮供应等等。

　　目前，猪冻精解冻后活力和受精能力在短时间内不可能有大的突破，但随着畜牧科技人员掌握冻精最佳输精时间技术的提高，相关设备的投入与改进，繁殖新技术的发展和运用，以及增加输精剂量和次数，冻精的受胎率可达到理想的水平，从而使得保存的冻精在遗传资源保护中有很好的利用前景。

　　一、掌握适时授精时间提高母猪分娩率的可能性

　　随着畜牧科技人员掌握冻精最佳输精时间的技术的提高，在使用冻精配种过程中会根据不同品种、不同胎次、年龄的母猪发情期长短作好发情鉴定；从母猪阴户红肿程度、颜色和干湿度，粘液透明度和颜色，用手掌按压母猪臀部甚至骑在其背部观察母猪行为等等方面来确定冻精最佳输精时间，从而提高冻精配种受胎率。

　　应用B超准确地鉴定母猪卵泡发育，掌握适时授精是提高冻精配种受胎率极其重要的措施。据国内外的研究发现，B超在兽医疾病诊断、人工授精、胚胎移植中鉴定卵泡发育和早期妊娠检测等方面均有快速、准确和精确的特点，B超和腹腔镜将成为未来人工授精中必备的工具。一般来说，在排卵前多少小时内授精，如果没有精密的手段和测量仪器，那一切都是经验性的、模糊的、不可靠的，随着仪器价格的下降，国外某些先进企业在种猪繁殖过程中利用B超和腹腔镜的越来越普遍，相信国内也将越来越多。Waberski等（1994）、Bolarin等(2006)的实验证明了最佳授精时间的选择是提高母猪分娩率的关键因素之一。

　　另外，增加输精剂量和次数也可以提高猪冻精受胎率的效果，报道显示，猪冻精输精受胎率与输精剂量及每个情期的输精次数呈正相关。

　　二、子宫深部授精方式的发展和运用

　　到目前为止，猪人工授精一般都应用一次性的海绵头的输精管在子宫颈深部授精。子宫颈内授精会有大量的精子(约25亿)输进子宫颈后部的皱褶，大多数的母猪在输精时和以后表现出精液逆流，因而，大约30％～40％输入子宫颈管的精子，在授精后1小时内从管中流出。同时，超过90％的精子在授精后2～3小时内被母猪的生殖系统——子宫颈、子宫、子宫输卵管连接部、输卵管壶峡连接部筛选排斥。这种大量的流失限制了能够到达子宫输卵管连接处的精子数。向成年母猪授精30亿冷藏精子，只有大约10万成功地到达了子宫输卵管连接处，大约1000个精子到达了输卵管峡部的精子储存库。此外，在精子质量差时损失更为严重，比如解冻后精子。实际上，在输卵管中冻精的有效精子数量一般比冷藏精子低。因此，将精液输到子宫颈后更深部位能够允许更多的精子到达子宫输卵管连接部是更合理的，与子宫颈内授精相比使用的精子更少。

　　随着输精技术的改进——长导管、手术、腹腔镜法等新的子宫角输精法（deeputerineinsemina-tion，DUI）的采用，在获得理想受胎率的基础上最大限度地降低了猪精液的输精量。与子宫颈内授精相比，达到子宫颈内授精（每次30亿以上精子）的受精效果，每次仅需输精1～1.5亿（子宫深部授精）。因此，这些方式都可以被视为在接近生产条件下（特别是在精液有限，或者高质量的种公猪的精液需要被尽可能有效的使用，或者保种需要的情况下），使用冷冻精液的实用、有效的授精方式。

　　三、繁殖新技术的发展和运用随着单精显微注射和克隆技术等繁殖新技术的发展和运用，猪的冻精有广阔的利用前景，尤其是灭绝猪种的冻精更有价值。

　　单精显微注射是1992年新兴的助孕技术，即在体外用机械注射方法将单个精子注入到卵子的胞质内，卵裂到一定程度时再移回宫腔的技术。

　　自1997年Dolly诞生以来，克隆技术在整个生物界成为热点，接着2000年“阳阳”的问世，弥补了我国山羊克隆技术的又一空白。即无论是胚胎克隆,还是体细胞克隆，都能发育为一个正常的个体。利用此技术，只要有濒危物种的胚胎细胞或者体细胞,那么就有可能使其生长为一个正常的个体。

　　冻精保种对我国地方猪种资源保护，乃至猪联合育种工作都具有较重大、积极的社会和经济意义。对于目前很多地方猪种种群个体数量在锐减，一些猪种灭绝，一些猪种面临灭绝的现状而言，各相关科研单位需加大这方面技术的研发与改进，以便能很好地适应现阶段养猪业的发展进程，充分发挥优良地方猪种优良基因的作用。此外，更重要的是各级部门制作并保存地方猪种冻精的工作宜早不宜迟。

　　（全国畜牧总站畜禽遗传资源保存利用中心朱芳贤刘丑生赵俊金）