隐孢子虫寄生于鸡的呼吸道、盲肠、法氏囊和泄殖腔。我国及全世界普遍分布。据报道，美国鸡隐孢子虫的感染率为6.4%，我国鸡隐孢子虫的感染率为8%～67.27%。隐孢子虫病对鸡的危害很大，人工感染试验表明，严重发病者在发病后2～3日死亡，死亡率达50.8%。隐孢子虫主要的感染方式为粪便中的卵囊污染饲料、饮水等经消化道感染。因此寻找有效的杀灭卵囊的药物，是防治该病的重要途径。隐孢子虫病的抵抗力很强，很多消毒剂不能将其杀灭，如碘酊、氢氧化钠、煤酚皂、次氯酸钠等。本试验选用了国内新近研制使用的一些消毒剂分别处理卵囊，以观察对鸡隐孢子虫卵囊的体外杀灭效果。报告如下。?<?xml:namespace prefix = o ns = "urn:schemas-microsoft-com:office:office" />
1 材料与方法 ?
1.1 化学试剂 菌毒敌(农乐)，湖南资江氮肥厂消毒剂分厂生产；强力清洁液，湖南省卫生防疫站健卫日用化工厂生产；速尔2号、速尔3号，湖南化工研究院研制并提供；漂白粉，市售(含氯)，优氯净，湖南化工研究院研制并提供；洗衣粉，湖南日用化工厂总厂生产；氨水，长沙二十二中化学试剂厂生产；甲醛，湖北大学化工厂生产。
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1.2 雏鸡 长沙鸡场购入的55羽1日龄长沙黄公雏。
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1.3 卵囊收集 野外采集鸡粪。取约5g，加入到15～20 ml水中进行混悬，然后用4层纱布过滤，将滤液2 000 r/min离心10 min，弃上清液，将沉淀物再混悬于比重为1.27的饱和蔗糖漂浮液中(漂浮液成分：颗粒状蔗糖454 g，蒸馏水 355 ml，液状石炭酸6.7 ml，2 000 r/min离心10 min。用直径约8 mm的金属环打取离心液表面糖膜，移至玻片上，光镜下检查卵囊。典型的卵囊形态为椭圆形，长约4～?5 μm?、宽约为3 μm，表面光滑、边缘略显红色，中央显绿色。用直径约8 mm的金属环打取离心液表面糖膜20～30次，每次洗入装有2.5%重铬酸钾的小瓶内。收集卵囊，置冰箱保存备用。?
1.4 试管内杀灭卵囊试验
以2.5%重铬酸钾液作溶剂，配制如下消毒剂：0.5%、1%、2%强力清洁液，0.5%、1%、2%菌毒敌，0.5%、1%、2%速尔2号，?2.5%?、5%、7.5%漂白粉，5%、10%福尔马林，2.5%、5%氨水。移取以上各溶液5 ml分别置入小试管内，再向各试管滴加分离收集的卵囊1万个左右，并设药物空白对照，每样平行设4管，作用3 h、4 h、12 h、24 h后观察。将上述溶液洗涤并浓聚至1 ml体积，移取2滴于玻片上，于40×10倍光镜下观察，随机计40个视野中完整卵囊数(卵囊数极少则计80个视野中卵囊数)，注意破裂、缺陷不规则的卵囊不计。?
1.5 动物接种试验
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1.5.1 卵囊的处理方法
向10支小试管内分别移取按上法配制的0.5%菌毒敌、0.5%速尔2号、0.5%?速尔3号、2.5%漂白粉、0.6%优氯净、2%强力清洁液、10%福尔马林、5%氨水、7.5%洗衣粉、?2.5%?重铬酸钾液(作药物空白对照)各5 ml，再各管内滴加约2.5万卵囊。0.5%速尔2号、0.5%速尔3号、2.5%漂白粉、0.6%优氯净作用12 h，2%强力清洁液、10%福尔马林、5%氨水、7.5%洗衣粉作用24h后分别用冷开水洗涤两次(尽可能降低重铬酸钾和各种药物的浓度)并浓聚至1 ml。
见表1。?
1.5.2 接种 将55羽4日龄雏鸡随机分成11组，每组5羽，分别用上述处理12 h后的卵囊液经口接种，并以凉开水作卵囊空白对照。
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1.5.3 检查
接种后第4天开始，隔日1次，分别采集各组全天的粪便，离心漂浮检查，直到14日，糖漂浮中 10个视野内卵囊数除以存活鸡数在1～5记为“+”，6～10个记为“++”，11～12个记为?“+++”?，20个以上记为?“++++”，未发现卵囊记为“-”。?
2 结果?
2.1 试管内杀灭试验〓结果见表2。由表2可见，各消毒剂处理法内均有完整卵囊，但菌毒敌、速尔2号、漂白粉中卵囊数明显低于空白对照中卵囊数，并随药物浓度增加而减少。6h后，菌毒敌液中都未见完整卵囊，速尔2号、漂白粉中完整卵囊数比3 h减少。12h后，速尔2号、漂白粉液中都未见完整卵囊。而2%强力清洁液、5%氨水、10%福尔马林、7.5%洗衣粉作用24h后，仍能找到完整的卵囊(注：洗衣粉中泡沫较多，显微镜下看不太清)。
表1 接种动物用卵囊的处理方法
序号 药名 浓度(%) 体积(ml) 卵囊(万) 时间(h） 处理
1 卵囊空白 - 重铬酸钾液5 - -
2 药物空白 - 重铬酸钾液5 2.5 -
3 农 乐 0.5 5 2.5 6
4 速尔2号 0.5 5 2.5 12
5 速尔3号 0.5 5 2.5 12 洗涤并浓聚至1 ml左右体积
6 漂白粉 0.5 5 2.5 12
7 优氯净 0.6 5 2.5 12
8 强力清洁液2.0 5 2.5 12
9 福尔马林 10.0 5 2.5 12
10 氨 水 5.0 5 2.5 12
11 洗衣粉 7.5 5 2.5 12
表2 各种试剂体外卵囊杀灭效果?
序号 药名 浓度(% 作用时间
3 h(B/A)?*6h(B/A) 12h(B/A) 24h(B/A)
1 水 - 28/40 30/40 26/40 28/40
2 强力清洁液 0.5 28/40 28/40 24/40 26/40
1.0 26/40 24/40 24/40 20/40
2.0 30/40 28/40 26/40 26/40
3 农 乐 0.5 6/80 0/80 0/80 0/80
1.0 4/80 0/80 0/80 0/80
2.0 4/80 0/80 0/80 0/80
4 速尔2号 0.5 14/40 10/40 0/80 0/80
1.0 8/40 5/80 0/80 0/80
2.0 2/80 2/80 0/80 0/80
5 速尔3号 0.5 2/80 2/80 0/80 0/80
1.0 2/80 4/80 0/80 0/80
2.0 2/80 3/80 0/80 0/80
6 洗衣粉 2.5 6/40 4/40 26/40 8/80
5.0 4/40 6/40 28/40 6/80
7.5 4/40 6/40 24/40 6/80
7 漂白粉 2.5 8/40 4/40 26/40 0/80
5.0 4/40 2/80 4/40 0/80
7.5 3/80 2/80 4/40 0/80
8 福尔马林 5.0 26/40 24/80 26/40 22/40
10.0 28/40 28/40 28/40 20/40
9 氨 水 5.0 24/40 22/40 24/40 19/40
10.0 26/40 24/40 26/40 14/40
?* A表示随机视野个数 B表示A个视野中的卵囊数目
2.2 动物接种 结果见表3。由表可见，卵囊空白对照、0.5%农乐、0.5%速尔2号、0.5%速尔3号、2.5%?漂白粉、0.6%优氯净接种组在1～14日内均未查到卵囊。而药物空白对照，2%强力清洁液，10%〖KH*3〗
表3 化学药剂处理后卵囊动物接种效果
组号 接种数 药 名 4日 5日 6日 8日 12日 14日
1 5 卵囊空白 - - - - - -
2 5 药物空白 - - + ++ ++ ++++
3 5 0.5%农乐 - - - - - -
4 5 0.5%速尔2号 - - - - - -
5 5 0.5%速尔3号 - - - - - -
6 5 2.5%漂白粉 - - - - - -
7 5 0.6%优氯净 - - - - - -
8 5 2%强力清洁液 - - - + ++ +++
9 5 10%福尔马林 - - - + ++ +++
10 5 5%氨水 - - + ++ ++ +++
11 5 7.5%洗衣粉 - - + ++ ++ ++++
福尔马林，5%氨水，7.5%洗衣粉于接种后8～10日相继从粪便中查到卵囊。
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3 讨论
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速尔、菌毒敌、优氯净等曾有人报道，其对小牛的隐孢子虫卵囊有杀灭作用。本次实验采用试管内杀灭试验和动物接种试验结果表明，0.5%菌毒敌作用6 h，0.5%速尔2号、0.5%速尔3号、0.6%优氯净作用12 h，对鸡隐孢子卵囊有可靠的杀灭作用，因此可以用于环境消毒和污染粪便的处理。甲醛、氨水及次氯酸(漂白粉)的作用我们的研究结果与其他作者的结果尚不趋一致。史天卫等报道，10%甲醛、5%氨水18 h后能杀灭卵囊。陈兆国等报道，10%甲醛、25%氨水作用1 h可杀死卵囊。陈茂盛等报道，5%氨水、10%福尔马林作用24 h后仍能找到完整的卵囊，因此氨水和甲醛的杀虫效果还有待进一步研究。陈茂盛等报道，5%次氯酸钠液可杀死卵囊。5%次氯酸钠作用24 h后接种动物4天后无卵囊查出。看来次氯酸钠的杀灭作用也有待进一步研究。?
