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肾型传染性支气管炎是受到广泛重视和研究的一种由IBV引起的禽的急性、高度接触性传染病,它以肾肿大,尿酸盐沉积为主要症状,造成雏鸡大量死亡,蛋鸡产蛋量下降。IB在我国的大部分地区都有流行,经免疫接种的鸡群也时有暴发,给养鸡业造成严重的损失,所以在发病后能及时有效的进行治疗,是发病后减少损失的一个重要手段。本试验主要对不同的治疗方法对鸡体的影响进行研究。?
1 材料与方法
1.1 毒株 鸡肾传支毒株为自分离毒株;肾传支M41?株由本校生物研究所提供。?
1.2 肾炎散 为纯中药制剂,组方由大青叶、穿心莲、牡丹皮、黄芩、黄柏、蒲公英、栀子、生地、〖KG*4〗连翘、〖KG*4〗黄芪、木通、车前草、滑石、瞿麦、石韦、金钱草、甘草各等份,共为细末,按每只雏鸡1 g 混饲,各组用量相同。
1.3 肾炎康 本校药厂中试产品。主要由平衡盐类次为A(常山)>B(柴胡)>D(绞股蓝)>C(地榆)。同时方差分析还证明(见表3),常山对“禽球灵”的ACI影响极显著(P<0.01);柴胡对“禽球灵”ACI也具有显著的影响(P<0.05);而地榆和绞股蓝对组方ACI的影响则不显著(P>0.05).及维生素类药品配合而成,主要以调节体内酸碱平衡、促进损伤组织修复、利尿和促进尿酸盐排出为配伍原则,用量按0.2%饮水。
1.4 乌洛托品 市售成品,按说明用量混饮。?
1.5 实验动物及处理 取1日龄海兰雏鸡110只,将雏鸡在隔离消毒环境中进行实验前饲养,养至30日龄,取健康雏鸡100只进行分组实验,平均分为5组:A组:肾炎散治疗组,用自配纯中药制剂肾炎散进行攻毒后治疗;B组:肾炎散加肾炎康治疗组,应用自配药物肾炎散拌料饲喂,同时肾炎康饮水;C组:肾炎散加肾炎康加乌洛托品治疗组,在B组的基础上在饮水中加入乌洛托品;D组:肾炎康治疗组,只用肾炎康作为治疗药;E组:无治疗对照组,本组不进行任何的治疗处理。将分组的实验鸡称重后同时进行攻毒,每只实验鸡分别滴鼻、点眼混合病毒稀释液各1滴,攻毒后进行正常饲养,攻毒后的第2天重复攻毒1次。
首次攻毒后的第3天,鸡群出现症状,主要是精神不振,毛乱,呆立,粪便变稀。攻毒后第5天时症状较典型,临床表现较重。此时按分组情况进行不同药物治疗。药物治疗5天后进行实验数据收集。?
1.6 观察或测定项目?
1.6.1 称重 实验雏鸡在实验过程称重两次。一次在治疗前对每只实验雏鸡进行称重,取得攻毒前个体体重,第2次在分组治疗后进行称重,然后计算出每只雏鸡的增重,进行统计分析。?
1.6.2 免疫后的抗体效价测定 微量血凝抑制(HI)试验按常规方法在96孔“V”型微量滴定板上进行。(1)将攻毒用种毒进行鸡胚接种,取典型蜷缩胚尿囊液首先进行5 000 r/min离心30 min,收集上清液,将上清液按1%~2%加入胰蛋白酶,于37℃作用4 h。然后用微量血凝(HA)试验测定其凝集价。(2)分组进行攻毒治疗后的雏鸡,在剖杀前采翅静脉取血1 ml,使血液凝固析出血清,然后依据ND的HI测定方法,测定试验鸡的血凝抑制(HI)价。?
1.6.3 肾的含水率 将分组治疗的雏鸡于治疗5天后第6天进行剖杀,取雏鸡完整肾脏(去掉肾周所有结缔组织),然后称取肾脏重量,再将称重后的肾脏进行烘干,称取烘干后的干物质重量,然后计算出每只雏鸡肾的含水率。?
1.6.4 血液中尿酸值 在剖杀雏鸡的同时,采取鸡血制备无蛋白血滤液,用磷钨酸显色法测定无蛋白血滤液中的尿酸含量。?
1.6.5 死亡率 治疗试验结束后,计取存活的鸡只数,确定各组的死亡率。?
2 结果 见表1。
表1 不同治疗方法对雏鸡的影响
组 别 A组 B组C组 D组 E组
抗体水平(log2) 8.8±0.9 10.1±0.9 10.65±0.9 8.8±0.9 8.8±0.8
增重(g) 102.9±16.2 119.4±11.0 100.4±8.1 99.2±14.8 63.6±12.2
尿酸值(mg/100 ml)13.2±1.3 10.8±1.4 11.3±1.2 10.6±1.3 15.3±1.4
含水率(%) 76.3±1.4 74.7±1.3 77.1±1.1 76.6±1.6 78.6±1.1
死亡鸡只数(只) 0 0 0 0 5
由表中抗体值可以看出,肾炎散实验组治疗后的平均抗体水平为8.8;B组的平均抗体水平为10.1;C组的平均抗体水平为10.65;D组的平均抗体水平为8.8;E组的平均抗体水平为8.8。?
由表增重显示,实验组A组平均增重102.9 g;B组的平均增重为119.4 g;C组的平均增重为100.4 g;D组的平均增重为99.2 g;E组的平均增重为63.6 g。血中尿酸值,实验组A组治疗后的血中尿酸值为13.2;B组血中尿酸值为10.8;C组血中尿酸值为11.3;D组的血中尿酸值为10.6。E组的血中尿酸值为15.3。
肾组织含水率显示,实验组A组肾组织的含水率为76.3%;B组肾组织的含水率为74.7%;C组肾组织的含水率为77.1%;D组肾组织的含水率为76.6%?;E组肾组织的含水率为78.6%。
? 由表内5只鸡的死亡看,只有E组对照组的鸡死亡5只,其他组均未发生死亡。?
3 小结与讨论
表1中的抗体值通过统计分析,肾炎散加肾炎康治疗组(B组)、肾炎散加肾炎康加乌洛托品治疗组(C组)与肾炎散组(A组)、肾炎康组(D组)、无治疗对照组(E组)组间差异有极显著意义。在较高抗体水平的B组(10.1)和C组(10.65)间差异无显著意义,而在低抗体的A组(8.8)、D组(8.8)、E组(?8.8?)间差异也无显著意义。由表中的抗体值可以直观看出,B组和C组的抗体平均值明显高于其他3组。所以试验证明肾传支的治疗过程中西医结合治疗能有效的提高患病鸡抗体水平,加乌洛托品无明显效果。
增重数据统计分析结果是:A组(102.9)、B组(119.4)、C组(100.4)、D组(99.2)增重均与无治疗对照组E组(63.6)有差异极显著意义,B组与其他4组差异有极显著意义。由表中的数据可看出,B组的增重明显高于其他4组,而E组的增重则明显的低于其他4组。试验证明,在传染性支气管炎治疗时中西结合用药能有效缓解疫病对鸡生长发育的危害,加乌洛托品无明显效果;单纯应用中药制剂或调节体内酸碱平衡的药物的效果都较差;在无治疗时传染性支气管炎对鸡的体重增加会产生严重影响。?
尿酸值通过统计分析,A组(13.2)与其他4组差异有极显著意义,E组(15.3)与其他4组差异有极显著意义,B组(10.8)、C组(11.3)和D组(10.6)间无差异显著性意义。尿酸含量的数据A组和E组的血中尿酸值明显高于其他3组。而E组血中的尿酸含量又比A组高,由此证明,在传染性支气管炎的治疗时,单纯应用中药制剂的治疗能促进尿酸盐排出,但效果较差;而应用中药制剂或调节体内酸碱平衡的药物配合治疗的效果较好,加乌洛托品后血中尿酸值略有升高,所以加乌洛托品对尿酸的排出有不利影响。?
肾含水率统计显示,B组(74.7)与A组(76.3)、C组(77.3)、D组(76.6)、E组(78.6)均有差异极显著意义。而E组(78.6)与其他组也有差异极显著意义,A、D、C组间差异无显著意义,肾含水率B组最低,E组最高;说明肾炎散加肾炎康的结合治疗要好于其他4组,而无治疗对照组的含水率最高,说明肾脏的炎症反应较重。A组的肾炎散虽然有一定的利尿作用,但作用较轻缓;C组的效果较差可能是由于乌洛托品破坏了肾炎康的酸碱平衡调节作用,D组肾炎康只是调节体内酸碱平衡,对病毒即无抑制作用也无杀灭作用,所以病毒对肾的损害不能消除,仍有炎症反应出现而使肾的含水率偏高。?
之所以采用肾含水率做为数据标准,主要是考虑到鸡的个体间的肾重的差异较大,〖JP2〗以肾重为数据标准小样本试验可能各组间存在着自然差异;而以肾含水率做为数据标准主要是基于在肾的炎症期,肾组织间的渗出增加而使组织中含水量增加,采用肾含水率则能显示出炎症急性期的组织中物质比例变化。
表中的鸡的死亡数,只有无治疗对照组死亡鸡只5只,死亡率为25%,其他4组无死亡。综合以上分析,可以确定肾炎散加肾炎康结合治疗时,不但鸡产生的抗体水平较高,而且鸡的增重效果较好,血中的尿酸含量也相对较低,由肾的含水率和剖检证明肾的炎症反应都较其他组轻,死亡率也较低。而另3种治疗方法,治疗效果不如肾炎散加肾炎康组,治疗效果都有这样或那样的缺陷。所以在传染性支气管炎治疗时采用纯中药制剂与调节体内酸碱平衡的药物结合使用能达到更好的效果。?