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复方白毛藤注射液对鸡新城疫灭活疫苗免疫功能的影响

零零社区网友  2006-01-16  互联网

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随着养鸡业规模化发展,家禽病原性疾病的暴发和流行呈现了新的特点,主要表现在病原体的变异性加快和耐药性增强,对病原性疾病的预防目前主要采取免疫接种的方法,但由于部分疫苗免疫力不强、质量不稳定、免疫保护期短等原因,致使对某些病原性疾病的预防效果一直不甚理想,因此,必须研制既能提高动物机体的免疫功能又能加强疫苗免疫效果的免疫增强剂。根据中药机理,笔者研制了纯中草药制剂——复方白毛藤注射液。该制剂对动物多种致病菌具有较强的抑制作用,且能提高实验动物小鼠的特异性及非特异性免疫功能,为探讨该制剂对雏鸡接种NDV灭活疫苗后是否具有免疫促进功能,特进行了该实验,现报道如下。

1 材料与方法

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1.1 试验材料 复方白毛藤注射液:由白毛藤、蒲公英、板蓝根、白术和黄连以一定比例用水醇法,按注射剂制备要求精制而成,每毫升注射液相当于生药1g,由湖南农业大学动物科技学院药理研究室研制。淋巴细胞分离液购自上海生工生物工程技术公司,Hank′s液和小牛血清由Sigma公司生产,鸡ND油乳剂灭活疫苗购自哈尔滨兽医研究所,鸡ND阳性血清购自中国兽医药品监察所。水平离心机(北京离心机厂生产)、双目显微镜(日本Nikou公司生产),微量移液器(上海求精仪器厂)。

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1.2 实验动物 1日龄非免疫三黄雏鸡,购自湖南省畜牧现代化研究所。

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1.3 动物分组及检测方法

取1日龄健康三黄雏鸡240只,随机分为4组,每组60只,用岳阳正大集团公司雏鸡颗粒料饲喂,按雏鸡饲养条件分组隔离笼养4天,从第5天开始,Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组分别肌肉注射复方白毛藤注射液0.05ml/只、0.1ml/只和0.2ml/只,一天1次,连注3天。7日龄时Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组分别接种鸡新城疫(ND)油乳剂灭活苗0.2ml/只。以上各组分别在14日龄、21日龄、28日龄、35日龄、42日龄和49日龄随机抽取10只空腹称重后无菌翅静脉采血2 ml,用抗凝剂处理(肝素20 IU/ml),按红细胞花环法测T淋巴细胞E花环百分率,无菌心脏采血分离血清,按间接血凝法测 NDV抗体滴度,然后将鸡宰杀,完整取下法氏囊、脾脏和胸腺,称重,测免疫器官指数,按以下公式计算:

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免疫器官指数=免疫器官重量×1 000/活重?

1.4 数据处理及统计分析 用t检验法分析组间差异。?

2 结果

2.1 对鸡T淋巴细胞E花环的影响

Ⅱ组(中剂量组)复方白毛藤注射液能提高T淋巴细胞E花环形成率,与Ⅳ组相比较,28日龄差异显著(P<0.05),35~42日龄,差异极显著(P<0.01),49日龄差异显著(P<0.05)。

见表1。

表1 复方白毛藤注射液对鸡T淋巴细胞E花环的影响(略)

2.2 对鸡NDV抗体水平的影响 Ⅱ组(中剂量组)的复方白毛藤注射液能提高鸡NDV抗体滴度,与Ⅳ组相比较21日龄时高于Ⅳ组,差异显著(P<0.05),28~35日龄差异极显著(P<0.01),42日龄差异显著(P<0.05)。见表2。

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2.3 对鸡免疫器官发育的影响

Ⅱ组(中剂量组)复方白毛藤注射液对鸡的胸腺、脾脏及法氏囊均有一定的促生长作用,28~35日龄,Ⅱ组的各脏器指数均高于Ⅳ组(P<0.05),到生长后期则无显著差异,详见表3。

表2复方白毛藤注射液对鸡NDV抗体滴度(log2)的影响(略)

表3复方白毛藤注射液对鸡免疫器官指数的影响(略)

3 讨论

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3.1 鸡的胸腺和法氏囊在幼龄期比较发达,开始性成熟时逐渐萎缩,最终完全消失。胸腺主要是产生与细胞免疫活动有关的T淋巴细胞。法氏囊的功能与体液免疫有关,是产生B淋巴细胞的中枢淋巴器官。脾脏的功能主要是参与免疫反应,胸腺和法氏囊是家禽产生新城疫特异性抗体的主要免疫器官。本试验表明,中剂量组复方白毛藤注射液能促进胸腺和法氏囊的生长,促进脾脏的生长与发育,Ⅱ组与Ⅳ组比较从28日龄开始差异显著(P<0.05),一直延续到35日龄。由于脏器指数的增加,一方面导致鸡体内的T淋巴细胞的数量增加,促使T淋巴细胞转化,而提高T淋巴细胞E花环形成率;另一方面,促使B淋巴细胞的数量增加,产生特异性抗体的能力增强,致使NDV抗体滴度明显增高,T淋巴细胞E花环形成率及NDV抗体滴度均在35日龄达到最高,处在胸腺、法氏囊和脾脏生长与发育的最佳期(28日龄~35日龄)。因此,复方白毛藤注射液能提高T淋巴细胞E花环率及NDV抗体滴度与该制剂具有促进胸腺、法氏囊及脾脏的生长与发育具有密切关系,此结论与实验结果基本一致。?

3.2 复方白毛藤注射液对动物机体免疫反应的强度与注射药物剂量有关,实验证明,低剂量组(0.05ml/只)所发挥的免疫效应与高剂量组(0.2ml/只)发挥的免疫效应无显著差异(P>0.05),都比中剂量组(0.1ml/只)的免疫效应差,说明机体免疫能力的发挥与药物最适免疫剂量有关,并不随剂量的增大而免疫能力增强,这与天然免疫增强剂在高浓度时往往表现免疫活性或免疫抑制是一致的。?

3.3 复方白毛藤注射液是依据中兽医理论和药剂学原理,用水醇法制备的中草药制剂,该制剂中含有生物碱、酮类、有机酸及小分子多糖等各种生物活性物质。白毛藤中含的各种生物碱具有抗病毒作用,全草入药能促进抗体的生成并能在一定程度上增强机体的非特异性免疫生物学反应。板蓝根多糖能增加小鼠脾重、白细胞总数及淋巴细胞总数,而且能增加正常小鼠外周T淋巴细胞转化率。蒲公英水提物能增加动物机体的免疫功能,还能显著提高人外周血液中淋巴细胞的转化率,激发人体的免疫功能。黄连素中的小檗碱有抗微生物及免疫调节作用,还能增强动物体内白细胞吞噬功能。白术中含有多糖PAM和苍术酮,能促进白细胞及单核巨噬细胞的数量及功能,并且能提高特异性免疫的抗体水平,延长抗体存留时间。该制剂中多种活性成分可能作用于动物机体不同的免疫靶器官,各种靶组织发挥多种免疫功能,产生组合免疫药理效应,增强机体的免疫功能,此免疫增强作用与实验结果基本一致。?



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