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鸡减蛋综合征(EDS-76)研究进展

零零社区网友  2006-01-12  互联网

鸡减蛋综合征(Egg Drop Syndrome-1976,EDS-76)是一种由腺病毒引起的病毒性传染病,其主要特徵是产蛋量骤然下降,蛋壳异常,蛋体畸形,蛋质低劣。鸡减蛋综合征(EDS-76)最早是由Van Eck於1976年首先报导该病在荷兰发生,1977年分离到EDS-76病原体(病毒)。该病可使鸡群产蛋率下降10~50%,蛋的破损率可达38~40%(Darbyshire,1980),无壳蛋,软壳蛋达15%,给养鸡业带来严重的经济损失,被列入鸡四大病毒性传染病之一。因此,世界各国对此极为重视。随着我国从国外引种频繁,近几年也被发现并引起高度重视的EDS-76新病,各方面的研究取得了很大进展。

一、病原学

1. 病毒形态特徵:

EDS-76的病原是腺病毒属无囊膜的双股DNA病毒,其粒子大小为76~80nm,病毒颗粒呈正二十面体,衣壳有12个顶,30个棱,252个壳微粒。其中240个六聚体,12个五聚体分别位於二十面体顶角上(电子显微镜下的超微结构)。衣壳的结构,壳微粒的数量等均具有典型的腺病毒特徵。病毒DNA的分子量为22.6×106道尔顿,这明显的小於鸡腺病毒代表毒株鸡胚致死孤儿病毒(CELO)的分子量28.9×106道尔顿,与哺乳动物的腺病毒相近。

2. 病毒免疫学及血清学特点:

EDS-76病毒於经口接种後7天可在血清中检出HI抗体,14~21天後HI抗体达到高峰,HI滴度在1:1280-1:2560之间,30天後开始下降,但一直都能检测出HI抗体。AGP试验抗体可在经口感染後6~9天检出,15天後开始下降。VN抗体可在接种後6天时检出。ELISA抗体在接种後6~7天可以检出。EDS-76病毒含有红细胞凝集素,能凝集鸡、鸭、鹅的红细胞。而其它禽腺病毒主要是凝集哺乳动的红细胞,这与EDS-76病毒不同。

3. 病毒的理化特性:

EDS-76病毒有抗醚类的能力,在50℃条件下,对乙醚、氯仿不敏感。对不同范围的pH值性质稳定,即抗pH范围较广,如在pH值为3~10的环境中能存活。加热56℃可存活3小时,60℃加热30分钟丧失致病力,70℃加热20分钟则完全消灭,在室温条件下至少存活6个月以上。0.3%甲醛24小时,0.1%甲醛48小时可使病毒完全消灭。

4. 病毒的生存特性:

EDS-76病毒能在鸭肾细胞、鸭胚成纤维细胞、鸡胚肝细胞、鸡肾细胞和鹅胚成纤维细胞上生长,且增殖良好;在雏鸡肝细胞、鸡胚成纤维细胞、火鸡细胞上生长不良;在哺乳动物细胞上不能生长。接种在7~10日龄鸭胚中生长良好,并可使鸭胚致死,其尿囊液具有非常高的血凝滴度,可达218;而接种在5~7日龄鸡胚卵黄囊中,可使胚体萎缩,孵出率降低。

5. EDS-76毒株分离:

自1976年Van Eck在荷兰发现EDS-76,1977年分离出病毒以来,各国相继陆续分离出了EDS-76病毒株:(1)1978年McFerran J.B在北爱尔兰从患鸡鼻粘膜病料中分离到Mc-127株,即"血凝因子127"。(2)Baxendale(1978)在英格兰从鸡的外周血细胞中分离到了BC-14株。(3)由英国毫顿禽病研究所从病鸡的泄殖腔中分离到D-61株。(4)匈牙利学者分离到B8/78株。(5)台湾分离到TN株。(6)日本分离到H-62株,Jap-1、KE-80及ME-80株。(7)法国从引进的鸡中分离到38、77株。(8)南京农业大学在中国大陆首次从外地引进的海赛克斯鸡中分离出EDS-76病毒株,命名为NE4株。江苏农学院分离出H91-1株(朱国强,1992)。江苏牧医所分离出GS-1株。四川省畜牧兽医研究所(1992)分离出CH-1株。

二、流行病学

1. 分布:

EDS-76流行十分广泛,呈世界性分布。现除了中国大陆和台湾已发现有此病外,欧洲的荷兰、法国、英国、义大利、德国、西班牙、丹麦、比利时、瑞典、挪威、俄罗斯、南斯拉夫、奥地利、波兰、匈牙利、希腊、卢森堡、以色列等;美洲的美国、巴西、阿根廷、墨西哥等;非洲的安哥拉、尼日利亚;大洋洲的新西兰、澳大利亚;亚洲还有日本、印度、伊拉克、南朝鲜、新加坡等都发现有该病发生。中国大陆的北京,广州、鞍山、大连、天津、济南、广东、上海、无锡、山东、山西、河南、江苏、四川等省地已发现有此病。

2. EDS-76的易感动物:

EDS-76病毒除了可使不同品种,不同年龄的鸡感染外,在家鸭、家鹅、野鸭、珠鸡、火鸡、鹌鹑、俄罗斯鸭、北京鸭、天鹅、加拿大鹅、凫、海鸥、麻雀、猫头鹰、鹳和白鹭等也可产生不同程度的抗体和排出病毒。鸭感染後虽不发病,但长期带毒,带毒率可达80%以上。

3. 传采方式及传播途径:

EDS-76主要是经垂直传播,也可经水平传播。垂直传播是被感染的精液和有胚胎的种蛋传播给下一代(McFerran et al., 1978)。水平传播主要是通过唾液、泄殖腔排泄物排毒。而自然感染是经口感染。被污染的鸡蛋、盛蛋工具、鸡场、饲料、用具是经常性的传播媒介。

4. 流行形式:

EDS-76的流行一般发生在产蛋50%期与高峰期之间,即25~35周龄期间,产蛋下降幅度一般为10~25%,高达30~50%,持续4~10周,然後恢复到原来的产蛋水平,产蛋曲线呈"马鞍形(见图1)。Pejkovski等(1982)报导,发病鸡第一周变形占33.9%,第二周占49.4%,第三周占39.6%,第四周占26.1%,第五周逐渐恢复到正常。Baxendale(1977)对自然感染EDS-76的鸡群观察发现,EDS-76流行主要发生在26~32周龄,病鸡的受精率正常,但孵化率则明显降低,死胚率由正常的6~8%增加到10~12%。EDS-76的水平传播速度缓慢,病毒在整个一栋鸡估扩散大约需几周。鸡粪是水平传播的主要方式,故平地饲养比笼养传播迅速。

5. 流行因素:

(1)鸡体内病毒的活化:鸡在性成熟前为隐性感染,当毒离开产时所遇到的一此应激因素,促使激素分泌发生改变,这样就成长EDS-76病毒活化的启动因子,从而导致发病。所以,在鸡开产时,才表现出临床征状。

(2)鸡的易感性:EDS-76的流行,主要取决於病毒毒力的强弱和鸡对病毒的易感性。有人观察发现,EDS-76病毒对20周龄以下的鸡感染率较低,仅为8%;20周龄以上的鸡感染率较高,这可能与卵巢的发育及产蛋有关。用微量血凝抑制(MHI)试验调查表明,公鸡的易感性比母鸡高(辛盛鹏,1993)。

(3)检疫不严:在进口种禽味未经严格疫和隔离观察,随进口种禽而带入本病。国内许多地方从外省地方州引进禽类尤其是种鸡种蛋时,未经严格检疫而带入本病。

(4)种蛋选择不利:在选择种蛋时,未把产蛋下降期的蛋和异常蛋彻底剔除,从而造成本病的垂直传播。

(5)消毒不严或消毒效果不确实:由於EDS-76病毒对一些化学消毒药物有较强的抵抗力,所以,一般消毒药物很难奏效。故而,消毒时必须选用合适的消毒药物和达到一定的消毒时间。

(6)未经免疫接种:由於该病是近几年来在国内才发生的新病,所以对本病容易忽视,大多未进行疫苗预防接种,或有的在预防接种时效果不确实,致使鸡群对本病毒有较高的易感性,一旦发病,容易流行。

三、临床征状及病理变化

1. 临床征状:

鸡患有EDS-76主要表现出产蛋下降。患病鸡群部分鸡可出现精神差、厌食、羽毛蓬松、贫血、腹泻等征状。有的鸡在产蛋前已感染本病,终生不再出现产蛋高峰。在产蛋下降的同时,鸡常产各种畸形蛋,如蛋壳皱缩,蛋形改变,蛋壳表面附有数量不等的石灰斑沉着,蛋壳颜色改变,褐色蛋壳退色变成灰白色,也有出现软壳蛋,无壳蛋,甚至这种蛋在一天内可产数个。蛋清希薄如水,内有部份混浊的絮状物附着。中雏感染本病後常无临床征状,老龄鸡感染本病时,在出现异常蛋前後可伴发轻度腹泻征状。由於患EDS-76的鸡日龄不同,因此感染的轻重程度也不同,对日後产蛋量的影响也不同。据报导,以174日龄发病者最轻,214日龄发病者次轻,259日龄发病者最重(赵清,1992)。

2. 病理变化:

发生本病的患鸡常缺乏明显的病理变化。其特徵性病变是输卵管各段粘膜发炎、水肿、萎缩。病变的卵巢缩变小,或有出血,子宫粘膜发炎,肠出现长他性炎征。病理组织学检查子宫输卵管腺体水肿,单核细胞浸润,粘膜上皮细胞变性坏死。子宫粘膜及输卵管固有层出现浆细胞、淋巴细胞和异嗜细胞浸润。输卵管上皮细胞核内有包涵体,核仁,核染色质偏向核膜一侧。包涵体染色有的呈嗜酸性,有的呈嗜鶺性。人工感染SPF鸡後,子宫出现淋巴滤泡,其它器官无明显变化。Moorthy(1987)报导用127株病毒感染来航鸡,曾典型的病理组织学变化是肺、肝、肾及腺胃出血和淋巴样细胞侵润,生殖器官只见输卵管萎缩,卵巢纤维化或有时有出血,卵泡软化,其它无明显病理变化。

四、EDS-76导致产蛋异常的发病机制

患有EDS-76的鸡出现产蛋异常是由於EDS-76病毒侵害靶器官及其复制场所─ ─输卵管功能异常所致,健康鸡输卵管漏斗部和峡部粘膜的pH值为6.5±0.3,而患有EDS-76的鸡此处的pH值则为6.0±0.3(Van Eck,1979),这就表明了子宫粘膜内的pH值的改变,导致了粘膜分泌功能紊乱。又由於酸度增加,溶解了大量钙质,因而蛋壳形成受阻。萤光抗体的定位检查表明。EDS-76病毒能使粘膜上皮细胞变性、脱落、细胞浆内分泌颗粒减少或消失及子宫的腺体细胞萎缩,这样使得钙离子转运障碍和色素分泌量减少,并使输卵管内pH值明显降低,这种酸性环境可以溶解卵壳腺所分泌的碳酸钙,使钙盐沈着受阻,从而导致蛋壳形成紊乱而出现蛋壳异常。由於输卵管各部功能异常使鸡的正常产蛋周期和排泄机制受到乾扰和破坏,导致产蛋率下降或产蛋停止。

五、诊断

由於许多疾病和环境因素都可造成密集饲养的鸡群发生产蛋下降,因而诊断时必须根据病的流行特点,临床征状,病理变化,血清学及病原分离和鉴定等进行综合分析和断定。

1. 流行特点:

一般发生在产蛋50%期与产蛋高峰期之间,即25~35周龄期间。

2. 临床征状和病理变化:

在按照规定的正常的饲养管理条件下,鸡群突然发生不明原因的群体性产蛋下降,并同时伴有畸形蛋,蛋壳褪色,变薄,蛋质下降。剖检见有典型的生殖道病变。取病变粘膜压片,进行包涵体染色,观察其包涵体。临床上无其他特异性表现时,可初步怀疑本病,以便早期诊断。

3. 病毒分离与鉴定:

从患鸡的输卵管,变形卵泡,无壳软蛋,泄殖腔、鼻咽粘膜,肠内容物,粪便等采集病料,经过常规灭菌处理後接种在鸡肾或鸭肾细胞上,孵育72~96小时後观察细胞病理变化及核内包涵体(需进行包涵体染色),并用血凝(HA)及血凝抑制(HI)试验进行鉴定,用参比标准阳性HI血清检测出细胞培养物的效价。接种在5~10日龄鸭胚尿囊腔,可使鸭胚致死,其尿囊液有高的凝集滴度。从EDS-76血清阳性的鸡中,病毒的分离率约为63%。从产蛋异常的鸡群中,病毒分离率可达60%。

4. 血清学方法

(1)血凝抑制(HI)试验:

这是诊断EDS-76最常用的血清学方法之一。其原理是,EDS-76病毒含有红细胞凝集素,可凝集鸡、鸭、鹅的红细胞,其凝集作用可被相应的EDS-76病毒抗血清所抑制,具有很高的特异性和敏感性。HI试验多采用微量法,所以,也有叫做微量血凝抑制试验(MHIT)。试验用的抗原来自鸭肾或鸡肾细胞培养物制备,也可用鸭胚尿囊液制备。抗原采用4个血凝单位(4HAU),用pH7.1PBS,指示系统所用红细胞为0.8~1%的鸡红细胞,采用常规操作程序进行。HI阳性标准在目前尚未统一,有人把1:32作为阳性,也有人将1:8判为阳性。B.N.布鲁耶夫报导,感染EDS76後2~3周内的新鲜鸡血清,HI滴度可达1:1280-1:2560。

(2)琼脂扩散(AGP)试验:

EDS-76病毒抗原与相应抗体在琼脂凝胶中双向扩散,在交接处形成肉眼可见的沉淀线,可用此法来检测EDS-76病毒的抗原或抗体。按Darbyshire提出的方法,是在含1.5M NaCl PBS(0.01M,pH7.2)制备的1%琼脂板上进行。

(3)病毒中的(VN)试验:

EDS-76病毒能致细胞发生组织学病变,并产生核内包涵体,这种作用可被相应的抗血清中和而消除,故可采用本试验检验EDS-76抗原或血清抗体。

(4)免疫萤光(IF)法:

Baxendale(1977)采用萤光法确定了EDS-76病毒与其它禽腺病毒有相同的抗原成份(抗原决定簇)。Adair(1978)采用萤光技术证明EDS-76病毒主要定位於感染细胞的细胞核。Mockett等(1984)也得出了同样结果。

(5)鶣联免疫吸附试验(ELISA):

采用常规操作程序,此法与HI试验相似,其敏感性好,特异性高。

(6)免疫斑点试验(IBT):

采用常规操作程序。

以上几种方法均可用於EDS-76的诊断,各有其优缺点。HI法和IF同样敏感,AGP法敏感性比IF和HI法稍差一些。采用ELISA,AGP,HI对EDS-76病毒感染的检测结果比较证实,ELISA比AGP更为敏感,与HI结果相似,但ELISA可采用两种抗原包埋(被),简化了与其它禽腺病毒感染的鉴别诊断。Piele(1985)利用HI,ELISA和AGP检测实验感染後的鸡血清和蛋黄中不同时间的EDS-76抗体,认为氯仿提取的蛋黄适合於HI,ELISA和AGP试验。

5. 与其它能致产蛋下降病的鉴别:

(1)EDS-76与传染性支气管炎的区别:鸡传染性支气管炎除了有产蛋下降外,有明显的呼吸道征状,气管锣音,喘息,咳嗽等。

(2)EDS-76与非典型鸡新城疫的区别:非典型鸡新城疫也能引起产蛋下降,产软壳蛋。但鸡群中还会同时出现病死鸡,当全鸡群测定鸡新城疫抗体时,能得出鉴别。死鸡剖检病变有鸡喉头气管粘膜,腺胃粘膜,盲肠扁桃体,直肠及泄殖腔等处粘膜出血。

(3)EDS-76与脂肪肝综合征的区别:脂肪肝综合征是鸡的一种代谢病,以肝异常脂肪变性,产蛋突然下降,鸡冠苍白,死亡率高。主要发生在肥胖鸡。死鸡剖检发现肝肿大,易碎,呈黄褐色,肝破裂出血。

(4)EDS-76与钙、磷、维生素A,D缺乏征的区别:钙、磷、维生素A.D缺乏征也引起产蛋下降,产无壳蛋,软壳蛋,早产。卵壳腺机能不正常,因而不能分泌充足的壳质而产壳蛋,当饲料中加入添加剂钙磷和维生素A.D後,就很快恢复。

(5)EDS-76与鸡新城疫(ND),鸡传染性支气管炎(IB),鸡脑脊髓炎(AE)等能引起产蛋下降疾病的产蛋曲线比较如图1。

六、防制

本病目前尚无有效的治疗药物的方法,故防制上仍然实行"以防为主"的方针,其主要措施是"净化、免疫、监测"。

1. 严格检疫:在从国外或外地引进鸡或蛋时,进行严格检疫,并将鸡隔离一段时间观察,及时做到早期防制。

2. 净化措施:当鸡在40周龄以上时,如果祖代鸡已有了抗体,出的蛋也正常了,此时取蛋孵雏,将雏鸡分成若干组,间隔6周测定HI抗体,淘汰阳性组。当这一世代的鸡达到40周龄时,从阴性组收集下一世代种蛋,直到达到清除之目的。McFerran J.B.等建议,应长期进行血清学检查,用HI试验对鸡群进行感染有无的监测,扑杀阳性鸡,长期坚持,方能达到净化之目的。

3. 免疫接种:免疫接种是本病的主要预防措施。本病最早在欧洲大流行时,曾在消灭病毒中加入油类佐剂制成了BC14疫苗或用鸭胚细胞苗,接种收到了满意效果。现在应用较多的单苗中,也是 BC14毒株油剂甲醛苗,该苗接种18周龄後的母鸡,经肌肉或皮下接种0.5ml,15天後产生免疫力,抗体可维持12~16周,以後开始下降,40~50周抗体消失。在匈牙利采用的是B8/78株病毒制备的灭活苗,免疫後3周,95%的免疫鸡HI抗体可达最高峰。

在双价苗研制中,采用了EDS-76病毒127株和鸡新城疫消灭活二联油佐剂苗的研制,已取得了较好的效果。譬如Bouquet等用127株细胞培养物和新城疫病毒株的鸡胚尿囊液,经β-丙酸内酯灭活後制成,对17~18周龄鸡接种表明,该苗有较好的保护作用和安全性。Zanella A. 研制的二联灭活苗,接种16~20周龄的蛋用鸡,其鸡新城疫和EDS-76的HI抗体滴度可达27至210,至少在一年内可抵抗这两种强毒的攻击。

国外已有人研制出了ND-EDS-76-IBD(鸡新城疫一减蛋综合征─传染性法氏囊病)三联灭活疫苗,取得了明显效果,并且互相间不产生免疫干扰产蛋鸡能产生坚强的免疫效果,免疫期在6个月以上,必要时可重复接种免处。

4. 控制措施:

当发生EDS-76时,虽然目前尚无有效的治疗办法,但可用EDS-76高免蛋黄注射液,给病鸡每只肌肉注射或皮下注射2毫升,同时配合补充维生素、钙、糖水等,改善营养条件,有一定的治疗效果,尤其早期使用,效果更佳。目前有的鸡场采取下列综合措施,收到了一定效果。

(1)对21~35周龄蛋鸡,可用饲料中添加土霉素和鶾喃唑酮,防止产蛋量下降。预防量:每吨饲料中加土霉素50~75克,鶾喃唑酮50~75克。治疗量:每吨饲料添加土霉素200克,鶾喃唑酮200克。

(2)加大饲料中维生素与微量元素比例,每隔1周,增大1倍,可提高孵化率及雏鸡成活率。

(3)提高饲料质量,蛋白质要保持在18~19%,并提高赖氨酸,蛋氨酸和胱氨酸的比例;提高胆硷,VitB12,Vit E的水平,以保护肝脏。满足鸡对钙的需要量,将其中30%的贝壳,以颗粒形式饲喂。



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