70年代以来科研院所在兰科植物中采用生物工程技术繁殖兰花有过报道,其效果是传统地方法无法和它媲美的,但由于种种原因此项先进的技术尚未得到推广。笔者带着在家庭环境里能否开展此项工作这个问题经两年的尝试,已获得小批量的春兰试管苗,现将具体做法介绍于后供兰友们参考。 一、建立小型家庭组织培养室,自制设备简易土法上马。众所周知该项工作要在无菌条件下进行。为此,研制密封良好的玻璃接种箱、净化空气装置,采取种种技术措施后转瓶污染率大大地下降,据统计得知1994.6.26至1994.8.26日污染率为44.8%,改用酒精喷雾降尘后1994.10.4到1994.11.26成功率上升为92%,这就给筛选最佳培养基配方赢得了时间,奠定了良好的基础。
二、在家庭环境里如何才能做到无菌操作呢?笔者着重从以下几个方面入手。
1.所有接触培养基的器皿能耐高温的用干热法(140℃~l50℃)处理,对不耐高温的用具采厂化学方法灭菌消毒。
2.为解决接种时需在火焰上进行的问题(因箱内几乎无空气)增添了一只300W的电炉,但因温度高易灼坏外植体,故又加设了通。风降温的设施。
3.为了减少刀具的第二次在环境中污染的问题,高温消毒后按放在一端封闭的简内,同时不断鼓入净化的空气加以冷却确保外植体安然无恙的进入营养基瓶中。
4.所有进入箱内的物品均需酒精消毒后才放进,凡是带菌者不许入箱,箱体消毒程序是酒精喷雾天紫外线消毒,并定期用甲醛加高锰酸进行熏蒸…… 三、选用适宜的培养基配方。诱导――分化――生根均采用M?S基加茶乙酸、细胞分裂素(6BA)。但不同的生长阶段还需做成分上的调整,特别是生根时由于兰生根较其他品种花卉难些故采用高浓度的NAA浸泡数秒的做法,效果良好。 四、外植体的采取、消毒。外植体以长根的幼苗(未展开叶),随采随接种最好,成活率较高(接种时节以10月一2月最好),外植体消毒笔者采取O.1升汞十1%。浓盐酸多次消毒的办法杀菌效果更佳。 五、培养环境。光照1000~2OOOLux,1O~16小时,培养温度26℃士2下生长,空气湿度应控制在较低的水平(70%~80%),否则极易再一次污染。
几点体会: 一、在家庭中建立小型组培室是可行的,它的投资少(可充分利用家中的条件),笔者从筹备到设备进行试验只花去数百元,该试验设备也可开展其他品种如木本、药用植物等的研究工作。
二、无菌操作必须从思想上重视,操作上谨慎才是。否则损兵折将,后果不堪设想。 三、目前因手下无实体显微镜,只能做以芽生芽的试验,拟采取一些措施如分期切制样品、液体加旋转床的方案,是取得大批量类原球茎的一种途径,其繁殖速度会大大地有所突破。
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